淫羊藿苷及其降解产物抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

文献报道淫羊藿苷有多方面的药理活性,初步研究表明淫羊藿苷具有抑制α-葡萄糖苷酶活性,但与目前临床应用的α-葡萄糖苷酶抑制剂相比有一定的差距,为改善其活性,拟通过水解得到淫羊藿苷的次级苷或苷元,在获得具有更强活性的α-葡萄糖苷酶抑制剂的同时,通过各水解产物的结构与活性的关系分析初步明确淫羊藿苷降解产物的活性作用基团,为将来继续研究奠定基础。本论文中,首先从淫羊藿药材入手,釆用钙离子技术,水提取淫羊藿黄酮,AB-8大孔吸附树脂富集纯化,得到淫羊藿总黄酮;采用ODS色谱柱分离得到淫羊藿苷;并且对淫羊藿苷进行酶水解、酸水解、酶水解与酸水解相结合的方式进行结构修饰,采用薄层色谱法、理化方法、核磁共振波谱法对水解后的结构修饰物进行了结构鉴定,分别为淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、水合淫羊藿素、环淫羊藿素及脱水淫羊藿素。建立了α-葡萄糖苷酶筛选模型,以酵母来源α-葡萄糖苷酶对前述各化合物进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选,实验结果表明,水合淫羊藿素及环淫羊藿素的活性不理想,脱水淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ体外活性较淫羊藿苷好,其中脱水淫羊藿素(IC50=0.102 mg·m L-1)的活性最好,与拜糖平(IC50=0.850 mg·m L-1)相比抑制活性更强,在较低的浓度下(0.05 mg·m L-1)就能够抑制α-葡萄糖苷酶的活性;以大鼠小肠内黏膜酶进行了活性验证,与前述酵母来源α-葡萄糖苷酶实验结果基本吻合;此外,对脱水淫羊藿素的抑制类型进行了研究,测得脱水淫羊藿素为α-葡萄糖苷酶的竞争性抑制剂。采用在正常ICR小鼠与四氧嘧啶造成的糖尿病小鼠负荷淀粉的情况下观察脱水淫羊藿素对血糖的影响、对小鼠血清中糖化血清蛋白的影响及对小鼠血清胰岛素的影响。实验结果表明,脱水淫羊藿素具有很强的降低正常ICR小鼠和四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠餐后各时间点的血糖值;同时,脱水淫羊藿素具有明显降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖,相同剂量下,脱水淫羊藿素比阳性对照药拜糖平的效果略佳,并存在一定的量效关系。本文应用Schrodinger软件进行分子对接设计,Docking energy的结果表明脱水淫羊藿素显示了较强的结合能力,活性最好,与我们实验得出的结论一致。降解产物的活性检测结果及软件分析结果的排列顺序均表明分子中所含的异戊烯基及酚羟基可能为淫羊藿苷降解产物发挥α-葡萄糖苷酶抑制作用的活性基团。