黑果枸杞总黄酮制备工艺优化和抗氧化、降血脂活性及成分研究

黄酮类化合物属植物次级代谢产物,天然无毒,具有多种生物活性。部分黄酮类化合物兼有抗氧化和降血脂作用,对预防动脉粥样硬化具有广阔的应用前景。本研究选用新疆地产黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.),从其叶中提取总黄酮,对总黄酮抗氧化和降血脂生物功效进行研究,为预防动脉粥样硬化提供新药来源,为黑果枸杞开发利用提供理论依据。主要研究内容及结果如下: 1.采用显色反应和紫外光谱法对黑果枸杞叶浸提液总黄酮进行鉴定。用分光光度法测定总黄酮含量,通过单因素最佳值筛选和多因素正交试验,得出从黑果枸杞叶中提取总黄酮的最佳工艺条件为:用60%的乙醇作溶剂,固液比为1:25,70℃下提取40min,提取率达0.23%,粗制品总黄酮含量达0.14%。 2.通过6种大孔树脂静态吸附和解吸附试验比较,结果表明AB-8型大孔树脂较适合于精制黑果枸杞总黄酮。选用该树脂精制黑果枸杞总黄酮的最佳条件为0.20mg/mL、pH=5.0的黑果枸杞总黄酮溶液上柱,流速为2.0mL/min,用95%乙醇洗脱,流速4.0mL/min、用量为5倍柱床体积,总黄酮回收率达79.82%。采用该工艺分离精制的黑果枸杞总黄酮含量为2.80%,比粗制品提高了20倍,说明该工艺切实可行,可以推广。 3.通过体外化学反应体系得出黑果枸杞总黄酮具有还原能力、清除·OH的能力和抗脂质体过氧化反应的活性。与生物大分子相结合反应得出黑果枸杞总黄酮可以抑制红细胞溶血、增强小鼠血清清除·OH的能力,降低小鼠肝脏MDA含量。 4.通过高脂血症模型小鼠体内试验得出,黑果枸杞总黄酮可以降低高脂血症小鼠血浆TC、TG和LDL-C含量,升高HDL-C含量,说明其具有降血脂功效。黑果枸杞总黄酮还可以提高小鼠血浆T-AOC、肝脏GSH-Px、SOD活力,降低MDA含量,说明其也具有体内抗氧化生物活性,可以作为预防AS的新药来源。 5.依据文献报道芦丁、槲皮素、木犀草素、异鼠李素和山奈素是抗氧化和降血脂的常见黄酮成分。本试验通过薄层层析和高效液相色谱分析得出黑果枸杞总黄酮亦含有此5种黄酮成分,在精制品中含量分别为0.8870%、0.0414%、0.0411%、0.0258%和0.0448%。5种黄酮成分的总量达精制品的1.04%,占黑果枸杞总黄酮含量的37.14%。黑果枸杞总黄酮的抗氧化和降血脂生物活性可能是这5种黄酮成分发挥作用的结果。