化橘红解酒功效与保健食品的研究

目的： 道地药材化橘红具有醒酒宽中功效,既往研究初步表明此功效与化橘红中富含的黄酮类化合物有关,为此开展了化橘红总黄酮解酒功效及其解酒口服液剂型的研究,为该岭南特有药材资源的综合开发利用提供科学依据。 方法： 采用UPLC色谱法分别对不同品种化橘红中四种黄酮类有效成分进行含测,并以HPLC色谱法对不同批次化橘红药材指纹图谱进行研究,并建立口服液用化橘红原料的质量标准。 采用水提醇沉法获取化橘红中的总黄酮,因总黄酮水溶性较差,直接制备成口服液剂型较为困难,故采用羟丙基-p-环糊精通过溶剂-搅拌法对化橘红总黄酮进行包合；并对影响包合过程的各因素(物料摩尔比、溶剂比、包合温度、包合时间、搅拌速度)进行单因素考查,以包合率和载药量为指标,找出主要影响因素,并采用正交法筛选出最佳包合工艺。通过显微镜鉴别法,差示扫描量热法,红外光谱法对包合物进行了研究,并与原药材、羟丙基-β环糊精、物理混合对照图片或图谱进行比对,鉴定包合物是否形成。 添加蜂蜜、柠檬酸、木糖醇对化橘红总黄酮包合物溶液进行口感调配得到口服液母液,稀释过滤后使用全自动灌封机灌封,并进行灭菌检漏,灭菌置换温度为100℃,灭菌温度为110℃,灭菌时间40min,冷却温度为100℃,检漏时间为5min,清洗时间5min,排泄时间为5min,真空压力为-0.06Mpa,灭菌压力为0.1Mpa。所得口服液成品按10版《中国药典》有关规定和检测方法对分别进行定性、定量、pH值、相对密度、微生物卫生考查,综合各项考查指标建立化橘红解酒口服液质量标准,并在温度为25℃±2℃,相对湿度为60%±10%的样品留样观察室内留样三批,按口服液质量标准检测规定项目检测,每月抽取1次,进行为期6个月的口服液长期稳定性考查。 采用小鼠灌胃280双蒸酒的方法,建立小鼠急性酒精中毒模型,考查小鼠耐酒剂量,并观察化橘红总黄酮口服液对急性酒精中毒的小鼠醒酒时间、自主活动的影响。 结果： 1.化橘红总黄酮质量标准与提取工艺研究 2013年所采不同品种化橘红样品中的柚皮苷含量,在大茶岭、假西洋、凤尾、金钱肚、黄绒果、陆福、光青中依次为：102.68mg/g、115.79mg/g、135.00mg/g、101.59mg/g、116.44mg/g、104.60mg/g、92.67mg/g,野漆树苷含量依次为：2.56mg/g、3.46mg/g、1.80mg/g、3.28mg/g、7.61mg/g、5.89mg/g、0.51mg/g,柚皮素含量依次为：0.59mg/g、0.62mg/g、0.62mg/g、0.66mg/g、0.54mg/g、0.55mg/g、0.63mg/g,芹菜素含量依次为：0.051mg/g、0.043mg/g、0.053mg/g、0.086mg/g、0.050mg/g、0.049mg/g、0.073mg/g。 指纹图谱研究表明：41批不同栽培品种化橘红药材指纹图谱相似度均≥0.906,14个共有峰中第一大峰为柚皮苷,第二大峰为野漆树苷。 口服液用化橘红原料质量标准为：毛橘红药材外层密被短小绒毛,果皮有皱纹和较多凹点,多为五角对称结构,直径宽13-20cm,内表皮黄白色,有脉络纹,气微香,味苦涩、微辛。样品粉末呈墨绿色或棕色。药材横切面表皮有非腺毛,气孔,副卫细胞排成放射形,中果皮散在螺纹式导管,有草酸钙方晶散在,外层存在少量油室,分泌细胞扁长形。水分不得超过11%；灰分不得过5%；本品按干燥品计算,柚皮苷含量不得低于8%。指纹图谱需有14个共有峰,且各共有峰保留时间应大致一致,RSD应不大于1%,共有峰的峰面积之合应占全谱总峰面积的99%以上。不同批次化橘红指纹图谱与对照指纹图谱相似度不得低于0.90。 2.化橘红总黄酮包合工艺研究 最佳包合工艺为：HP-β-CD与化橘红总黄酮摩尔比为1：1,无水乙醇与水的体积比为1：1,搅拌时间为2h,在最优工艺条件下,最大包合率可达77.1%,最大载药量可达14.0%,化橘红总黄酮经包合后溶解度增大12.7倍。 3.化橘红口服液质量标准研究 化橘红总黄酮包合溶液1mL加入2mL70%蜂蜜水、0.2g木糖醇、0.125g柠檬酸,用纯化水定容至10mL口感能达到最佳。 化橘红口服液质量标准为：pH值1.80-1.90,相对密度≥1.09,薄层色谱有柚皮苷、野漆树苷对应斑点,柚皮苷含量≥3mg/支,口服液微生物达标符合相关卫生规定。 化橘红口服液长期稳定性考查结果：留样三批次(20131004,20131005,20131006)经检查,pH值均在1.80-1.90,相对密度≥1.09,薄层色谱有柚皮苷、野漆树苷对应斑点,柚皮苷含量≥3mg/支,且细菌<10个/g,霉菌(酵母菌)<10个/g,大肠埃希菌、活螨未检出。4.化橘红口服液解酒功效初步研究 28。双蒸酒0.20mL/10g剂量组,小鼠出现急性酒精中毒数目为1只；0.25mL/10g剂量组,小鼠出现急性酒精中毒数目为6只；0.30mL/lOg剂量组小鼠出现急性酒精中毒数目为9只,且1只死亡；0.35mL/10g剂量组,小鼠出现急性酒精中毒数目为9只,死亡4只；0.4mL/lOg剂量组,小鼠出现急性酒精中毒数目为10只,死亡7只,确定小鼠28。双蒸酒耐酒剂量浓度为0.30mg/L。 先“药”后“酒”防醉试验中,口服液高、中、低剂量组睡眠潜伏时间分别为：(39.32±3.02) mim、28.52±2.90)min、(23.14±2.42) min,空白组、阳性药物组睡眠潜伏时间分别为：(21.56±3.66) min、(53.06±4.29) min,口服液高、中、低剂量醒酒时间分别为：(285.40±24.16)min、(328.58±23.12) min、(333.50±18.44) min,空白组、阳性药物组醒酒时间分别为：(334.80±29.65) min、(201.33±15.66) min。 先“酒”后“药”醒酒试验中,口服液高、中、低剂量组醒酒时间分别为：(327.09±31.13) mim、(346.11±23.12) min、(352.50±23.54) min,空白组、阳性药物组醒酒时间分别为：(368.27±44.20)min、(281.20±35.23)min。 攀附试验,口服液高、中、低剂量组攀附时间分别为：(279.4±22.1、273.6±10.6、265.1±18.4)s,空白组、阳性药物组攀附时间分别为：(254.4±31.5、316.0±25.3)s。 化橘红口服液高剂量组先“药”后“酒”醒酒提前率为14.76%,先“酒”后“药”醒酒提前率为11.18%。 结论： 1.化橘红总黄酮质量控制标准 从有效成分柚皮苷的提取率来看,渗漉法优于传统的热回流提取法,且更加符合大工业化生产,可节能环保。 在道地化橘红品种中假西洋柚皮苷含量最高；黄绒果野漆树苷含量最高。因化橘红有效成分总黄酮中柚皮苷和野漆树苷含量最多,因此从化橘红中所含柚皮苷、野漆树苷总含量来评价,假西洋、金钱肚、黄绒果品种质量均较优。 2.化橘红总黄酮包合工艺研究 羟丙基-β-环糊精能很好的包合化橘红总黄酮,增加其溶解度,所得包合物质量稳定,紫外最大吸收波长与未包合的总黄酮一致,不会产生干扰。 3.化橘红解酒功效口服液质量研究 口服液适量加入蜂蜜、柠檬酸、木糖醇后,可较好地屏蔽化橘红总黄酮的苦涩味,变为酸甜可口,且配方不含糖,适用于高血糖病患者服用。经过长期稳定性试验考查,所得工艺稳定,含测指标、澄清度和微生物卫生等指标均符合规定。 4.化橘红口服液解酒功效初步研究 化橘红保健口服液对于急性酒精中毒有着一定的疗效,能较快地醒酒并缓解醉酒过程中所产生的不适,且预防醉酒效果优于醒酒效果。