本论文用80%的乙醇对30 种中草药进行了提取,得到粗提物。利用滤纸片扩散法和双层平板法测试了30 种提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母、黑曲霉、桔青霉、荔枝霜疫霉菌、牛奶酸败菌七种供试菌的抑制作用。同时采用孢子悬液点接法和孢子液法测试提取物对黑曲霉和荔枝霜疫霉菌的抑菌率及对霉菌分生孢子萌发的抑制率。初步筛选筛选出抑菌效果较好和抑菌谱较宽的水菖蒲、丁香、高良姜、桂皮、大黄五种提取液,其对霉菌菌丝的生长和分生孢子萌发表现强烈的抑制作用,抑菌率保持在85%以上。水菖蒲、丁香、桂皮三种提取原液对荔枝霜疫霉菌抑制达到100%,与0.2%苯甲酸钠对照相当。五种提取液对供试菌MIC 测定的结果表明丁香提取液TW-15 效果最好。用五种提取液进行1:1:1 配伍的10 种配伍液对其中供试菌的MIC 值测定结果表明配伍液PW-6 是其中效果最好的配伍,对各供试菌均表现很强的抑制作用,配伍后对荔枝霜疫霉菌的MIC 值相对于TW-15 降低了一倍。
对丁香提取物TW-15 和配伍液PW-6 的理化性质初步研究结果表明:PW-6对荔枝霜疫霉菌的抑菌活性在对光照、温度、药效持续时间和保存时间测试上均优于TW-15,两种最佳抑菌pH 为6;丁香提取液TW-15 适用温度为低于60℃,而温度对配伍液PW-6 影响不显著;光照对两种提取物的抑菌效果影响皆不显著。
利用丁香提取液TW-15 和配伍液PW-6 两种提取液对青梨、葡萄和荔枝三种水果进行保鲜实验。实验结果表明:提取液在降低失重率、维持果蔬营养成分上效果明显,均优于未经保鲜液处理的对照。且配伍PW-6 保鲜效果也要好于单一提取液TW-15。提取物在七天内对荔枝果皮表面霜疫霉菌的生长有明显的抑制作用。
采用乙醇回流法对丁香提取液TW-15 中的有效抑菌成分丁香酚进行了分离纯化,提取最佳工艺回流溶剂为80%乙醇,回流时间为30min,溶解碱液PH=9～10,醇:水=3:1,萃取剂为乙醚;酸化度PH=5。利用化学显色、薄层层析、紫外光谱、红外光谱和HPLC 对丁香提取液TW-15 活性成分提纯后产品进行鉴定,证明活性成分为丁香酚,且存在于配伍液PW-6 中。丁香酚紫外光谱在282nm 处有一最大吸收峰,HPLC 保留时间为10.019min。
根据微生物呼吸抑制实验原理,测试丁香提取液TW-15 对啤酒酵母呼吸途径的抑制作用,通过比较其与碘乙酸、丙二酸、磷酸钠三种典型呼吸途径抑制剂的重叠率,其与典型抑制剂丙二酸的重叠率为32.5%,证明丁香提取液TW-15 的抑菌机理是抑制TCA 呼吸途径。
