雷腾舒的微生物转化合成及临床药动学研究

背景雷腾舒((5R)-5-羟基雷公藤甲素)是在天然活性化合物雷公藤甲素结构上经化学修饰而成、具有显著的体内外抗炎和免疫抑制活性的新药,正在进行Ⅰ期临床试验。目前雷腾舒主要以雷公藤内酯酮为原料经2步化学反应合成,总收率31%。 1.微生物转化法从雷公藤甲素合成雷腾舒 目的以雷公藤甲素为原料,采用微生物转化法合成新型抗类风湿药物雷腾舒。 方法筛选10株小克银汉霉菌,采用HPLC法检测转化液中目标产物雷腾舒的浓度并计算产率,优化转化系统。 结果模型菌株雅致小克银汉霉ATCC36112在pH4.5、底物浓度400μg·mL-1和转化10d等条件下,雷腾舒产率>70%。 结论小克银汉霉ATCC36112转化雷公藤甲素,为活性代谢产物雷腾舒的合成开辟了一条新途径。 2.人尿样中雷腾舒定量方法的建立及LC-MS/MS法在Ⅰ期临床研究中的应用 目的建立准确、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定人尿样中的雷腾舒,并将建立的血浆和尿中雷腾舒的分析方法应用于雷腾舒的Ⅰ期临床研究。 方法LC-MS/MS衍生化法测定人血浆、尿和粪中雷腾舒的浓度,以雷公藤甲素为内标,生物样品经乙醚：二氯甲烷(3：2,v/v)液液萃取后与苄胺在80℃条件下反应1h。采用Gemini C18(50mm×2.0mm,5μm)柱分离,流动相为乙腈和0.77mM氨水(pH10.0),梯度洗脱；采用API4000质谱仪,ESI源正离子模式,用于定量分析的离子反应分别为m/z484.5→192(雷腾舒衍生物)和m/z468.5→192(内标雷公藤甲素衍生物)。 结果测定人尿中雷腾舒分析方法的线性范围为0.0300～100ng·mL-1,定量下限为0.0300ng·mL-1,日内精密度(RSD)小于9.4%,准确度(RE)在-3.5～2.8%之间。单个样品色谱分析时间为6.5mmin。单次口服雷腾舒片在0.25～2mg剂量范围内,AUC和Cmax与剂量呈线性增长关系,每个剂量组各受试者48h内随尿累积排泄量均小于11%；进食影响实验中餐后口服雷腾舒片的Cmax和AUC相比禁食给药高,其余药动学参数均不受进食与服药顺序的影响；多次给药中雷腾舒在受试者体内未见蓄积。 结论建立了准确、灵敏的LC-MS/MS衍生化法测定人血浆和尿中的雷腾舒,该法适用于雷腾舒片的Ⅰ期临床药动学研究。