龙眼壳多糖的提取、分离纯化与性质研究

龙眼是药食兼用的植物资源,具有极高的食用和药用价值。龙眼果实含有14%～22%的壳,目前对龙眼壳开发研究程度较低。本论文选用40℃条件下烘干的新鲜龙眼壳为原料,以龙眼壳多糖为目标产物,探讨了热水浸提、微波和超声波辅助提取多糖的工艺条件,确立了龙眼壳多糖的最佳提取方法及工艺参数;对提取得到的粗多糖进行脱蛋白、脱色、DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex-G200凝胶柱层析等分离纯化研究;并龙眼壳多糖的理化性质进行了初步研究。论文研究旨在为龙眼壳的综合开发和龙眼壳多糖的功能性研究提供基础理论依据,主要研究内容和结果如下: (1)采用葸酮—硫酸法测定龙眼壳多糖含量,该法具有操作简便、精密度高、稳定性强、回收率高等特点,所得数据精确。 (2)以龙眼壳为原料,比较了热水浸提、微波和超声波辅助提取龙眼壳多糖的工艺条件,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对龙眼壳多糖的提取工艺进行优化。试验得出热水浸提法最佳工艺参数为:浸提温度59℃,时间3h,水料比35:1,多糖得率1.29%;微波辅助提取最佳工艺参数为:微波温度为68℃,水料比为35:1条件下提取4.7min,多糖得率高达1.98%;超声波辅助提取最佳工艺参数为:水料比为26:1,超声波功率100W,在57℃下提取10.5min,多糖得率为1.42%;三种提取方法相比较,微波辅助提取在龙眼壳多糖得率和提取效率方面具有明显优势。 (3)比较Sevag法、三氯乙酸法、生物酶法对龙眼壳粗多糖中蛋白质的脱除效果,试验结果表明,采用生物酶法效果最好。经木瓜蛋白酶酶解后,蛋白质脱除率达80%,多糖损失率为27%。 (4)比较5种树脂静态吸附、双氧水法和活性碳法的脱色效果,以树脂D900脱色效果最好。通过单因素试验研究了温度、吸附时间、pH值、树脂添加量四个因素对脱色效果的影响,采用正交试验确定了龙眼壳多糖最佳脱色工艺条件为:温度40℃,吸附时间2h,pH值4.5,树脂添加量7.5g,经验证试验得出,在此条件下,龙眼壳多糖的脱色率为84.1%,多糖保留率为64.2%。 (5)经脱蛋白、脱色、去除小分子杂质后得到龙眼壳粗多糖LP-1,经DEAE-52纤维柱层析分离,以蒸馏水洗脱效果最好,以0.1mol/L、0.3 mol/L、0.5 mol/L NaCl溶液洗脱峰型对称性差,出峰面积小,含糖量低。故试验中收集以蒸馏水洗脱的第8～18管洗脱液,浓缩醇沉后得龙眼壳多糖LP-2。 (6)将DEAE-52柱层析分离所得的LP-2经Sephadex G-200凝胶柱层析,得到一纯度较高的均一性多糖LP-3。 (7)通过理化性质研究表明,龙眼壳多糖LP-3为不含蛋白质及酚类物质、含有糖醛酸的非淀粉类多糖。紫外光谱分析结果表明该多糖组分不含核酸和蛋白质。