高速逆流色谱分离制备大豆皂苷的研究

大豆皂苷(Soyasaponin)是大豆中含有的一类重要的生物活性成分,具有显著的降血脂、抗动脉粥样硬化、抗病毒等多种重要的生理功能,在医药、食品等领域具有很大的应用潜力。但是由于具有较强的极性和起泡性,大豆皂苷的分离较为困难,难以商业化应用。因此,研究大豆皂苷的分离纯化对于促进大豆皂苷的应用和大豆深加工具有重要意义。 高速逆流色谱(High Speed Counter Current Chromatography,HSCCC)是近年来新兴的一种色谱分离技术,具有应用范围广、分离量大、避免样品降解等多种优点。但是目前还没有研究将高速逆流色谱技术应用于大豆皂苷的分离纯化,因此,本研究的目的就在于利用高速逆流色谱对大豆皂苷进行制备分离和单体纯化,为大豆皂苷的分离提取探索一种新的解决方案。 实验分为粗分和细分两步,粗分的目的在于从大豆皂苷粗提物中分离出大豆皂苷,而细分的目的则是从粗分得到的大豆皂苷混合物中分离出大豆皂苷单体。 大豆皂苷粗提物的粗分实验通过参考其它皂苷类化合物的HSCCC溶剂体系,辅以HPLC扫描法以及分配系数测定法,挑选出正丁醇-水和乙酸乙酯-甲醇-正丁醇-水两个体系作为粗分体系,并对溶剂体系的乙酸含量和进样量进行了优化。研究发现0～1%乙酸浓度下的乙酸乙酯-丁醇-甲醇-水(4:0.8:1:6,v/v/v/v)溶剂体系的保留率均较低,不能有效分离得到大豆皂苷,而5%乙酸浓度下的正丁醇-水(1:1, v/v)体系对大豆皂苷与大豆异黄酮等物质的分离效果最佳。另外,进样量也能对分离效果产生较大影响,对于柱体积300mL的HSCCC仪器,100mg是最合适的进样量。 细分实验通过参考其他皂苷单体的HSCCC溶剂体系,采用了氯仿:甲醇:正丁醇:水(4:3:0.1:2,v/v/v/v)体系和乙酸乙酯:正丁醇:水(1:6:7,v/v/v)体系对HSCCC粗分得到的大豆皂苷进行细分。实验分离得到了三种大豆皂苷,分别是大豆皂苷Ae、Aa和DDMP皂苷。HSCCC由于避免了固定支撑物的吸附和降解,能够很好的保留DDMP类皂苷的活性,是大豆皂苷分离的一个突破。 因此,综合看来,HSCCC不仅能够高效的将大豆皂苷从大豆皂苷粗提物中完全分离,并分析得到大豆皂苷单体,而且能够保持大豆皂苷中DDMP类皂苷的活性,是大豆皂苷单体组分分离纯化和制备的理想方法。