本文以牡丹品种‘洛阳红’、‘乌龙捧盛’、‘胡红’的试管苗的叶柄(近茎端叶柄、中间端叶柄、近叶端叶柄)、叶片、茎段等外植体为材料,研究不同的植物生长调节剂、培养光照条件对外植体诱导愈伤组织的影响,并探讨了不同品种及外植体类型对愈伤组织诱导的影响。同时以牡丹品种‘洛阳红’的花药和花瓣为外植体,探讨糖浓度、培养光源及不同植物生长调节剂对牡丹花药和花瓣培养的影响。并利用‘凤丹白’的愈伤组织进行体细胞胚的诱导,探讨牡丹愈伤组织诱导体细胞胚的激素种类和浓度。实验结果如下:
1.利用‘洛阳红’的叶柄、叶片、茎段诱导愈伤组织时,近茎端叶柄在6-BA(1.0mg/L)+2.4-D(2.0mg/L)的培养基诱导率最好,达100%;中间叶柄在6-BA(2.0mg/L)和6-BA(0.5mg/L)+2.4-D(2.0mg/L)的培养基上诱导效果最好,达100%;近叶端叶柄在6-BA(0.5mg/L)+2.4-D(2.0mg/L)和6-BA(0.5mg/L)+NAA(1.0mg/L)的培养基上诱导率达到100%;而叶片在6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.5mg/L)的培养基上诱导率最高,达94.4%;茎段在6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.5mg/L)和6-BA(0.5mg/L)+NAA(2.0mg/L)的培养基上诱导效果最高,达100%。
2.在不同光质下诱导‘凤丹白’试管苗的叶柄、叶片产生愈伤组织,结果表明:诱导近茎端叶柄产生愈伤组织的最佳光质比是100%B和R(红光):B(蓝光)=75:25;中间叶柄的最佳光质比是R:B=75:25和100%B;近叶端叶柄的最佳光质是100%B和100%R;叶片的最佳光质比是R:B=50:50。而对照处理的诱导效果最差。
3.以‘洛阳红’、‘乌龙捧盛’、‘胡红’三个品种试管苗的叶柄、叶片进行愈伤组织的诱导。结果表明:就品种而言,胡红诱导效果最好,乌龙捧盛次之,洛阳红的效果最差;就外植体类型而言,近茎端叶柄效果最好,其次是中间叶柄、近叶端叶柄,叶片效果最差。
4.在不同蔗糖浓度的培养基及不同光照培养条件下,进行‘洛阳红’花药的愈伤组织诱导,结果表明:以添加3%的蔗糖浓度的培养基最适宜花药愈伤组织的诱导,而添加6%和9%的蔗糖浓度的培养基均不适宜‘洛阳红’的花药培养;光照条件以弱的散射光诱导效果最佳,黑暗条件下次之,而对照条件下的诱导效果最差。‘洛阳红’花药培养的适宜培养基为MS+ PVP +6-BA(1.0mg/L)+2.4-D(2.0mg/L);而花瓣培养的适宜培养基则为MS+PVP +2.4-D(2.0mg/L)。
5.利用‘凤丹白’的愈伤组织进行体细胞胚诱导,观察到了球形胚;其诱导率最高的处理为23.1%,培养基是:1/2MS+PVP +NAA(0.1mg/L)+TDZ(0.1mg/L)。
