茯苓多糖的分离纯化研究

本文通过对茯苓多糖的提取、分离和纯化的一系列试验研究得出以下结论:1、首次采用有机溶剂脱脂后热水浸提法提取茯苓多糖,通过单因素和正交试验结合,得出脱脂最佳方法是:脱脂溶剂比(乙醇:乙醚)为1:9,脱脂时间为5h,样品与脱脂溶剂比为1:25g/mL;热水浸提的最佳工艺条件为料液比1:40,温度为50℃,浸提时间为7h。经验证,脱脂后热水浸提茯苓多糖提取率由原来的3.08%提高到4.13%,说明此方法可行有效。2、在茯苓多糖的除杂试验中,系统地进行了 Sevag法除蛋白和双氧水氧化法脱色的工艺条件研究。经综合考虑得出Sevag法除蛋白的最佳条件为:氯仿:正丁醇(v/v)为2:1,样品:试剂(v/v)为1:1,pH为5,除蛋白率为75.32%。双氧水氧化法脱色的最佳工艺方法为双氧水百分浓度为1.5%,温度为30℃,反应时间为5h,在此条件下茯苓多糖的脱色率为63.57%。3、除杂后的茯苓多糖采用微滤结合超滤法进行分离,得到PCP1,PCP2,PCP3三个茯苓多糖组分,通过反复Sephacryl S100-400凝胶过滤,得到 PCP1-A、PCP1-B、PCP2-A、PCP3-A、PCP3-B 五个多糖。紫外全扫描检测都不含有蛋白质和核酸,通过高效凝胶渗透色谱检测PCP1-A、PCP2-A、PCP3-B为均一多糖。最后,结合红外光谱、气相色谱以及核磁共振分析,PCP1-A、PCP2-A和PCP3-B均为以葡聚糖形式存在的中性多糖。