荜澄茄质量控制方法研究

荜澄茄系樟科植物山鸡椒Litsea cubeba (Lour.) pers.的干燥成熟果实,收载于《中国药典》2005年版(一部),具有温中散寒、行气止痛之功效,用于胃寒呕逆、脘腹冷痛、寒疝腹痛、寒湿郁滞和小便浑浊等病症。本研究以荜澄茄为研究对象,在对其化学成分进行提取分离的基础上,建立了芦丁含量测定的反相高效液相色谱法、总黄酮含量测定的紫外分光光度法、挥发油中6种成分同时含量测定的毛细管气相色谱法,同时进行了高效液相色谱指纹图谱的研究,较系统的评价了荜澄茄的质量,为荜澄茄的临床应用提供依据。 本研究采用硅胶柱层析、凝胶柱层析和半制备液相等多种色谱分离技术,从荜澄茄80%乙醇提取物中分离得到5个化合物,通过理化性质和波谱数据分析,鉴定其化学结构苷分别为：十六烷酸(hexadecanoic acid)、异东莨菪内酯(isoscopletin)、芦丁(rutin)、胡萝卜苷(daucosterol)和12,16-二羟基-55-亚硝基-2-氨基-6-氧杂-1(1,3,4),5(1,2,4)-二苯基双环[3.2.0]庚烷-7-酮(12, 16-dihydroxy-55-nitroso-2-aza-6-oxa-1(1,3,4),5(1,2,4)-dibenzenabicyclo [3.2.0]heptan-7-one)。其中,十六烷酸和芦丁为首次从该植物中分离得到,异东莨菪内酯为首次从该属植物中分离得到,12,16-二羟基-55-亚硝基-2-氨基-6-氧杂-1(1,3,4),5(1,2,4)-二苯基双环[3.2.0]庚烷-7-酮为新化合物。 本研究首次建立了测定不同产地荜澄茄中芦丁含量的反相高效液相色谱法。采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.05%磷酸(38：62)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为254 nm。采用正交试验设计,对芦丁的提取工艺进行了优化,最佳提取条件为20倍量甲醇加热回流提取2次,每次20 min。芦丁在1.664～62.40μg·mL-1(r=0.9994)范围内呈良好线性关系,提取回收率为101.2%,RSD=2.3%。结果表明,该方法简单、准确、可靠,为荜澄茄的质量控制提供依据。 本研究采用比色法测定了不同产地荜澄茄中总黄酮的含量。以芦丁为对照品,在500nm波长下测定吸光度,计算总黄酮含量。结合单因素试验和正交试验设计法,对荜澄茄中总黄酮的提取工艺进行了优化,最佳提取条件是：30倍50%乙醇在60℃水浴加热回流提取1 h。芦丁对照品在8.05～48.29 gg.mL-1(r=1.0)范围内与吸光度呈良好线性关系,方法回收率为99.2%,RSD=1.8%。 本研究建立了同时测定不同产地荜澄茄挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、柠檬烯、6-甲基-5-庚烯-2-酮和柠檬醛6种成分含量的气相色谱法。通过水蒸气蒸馏法进行挥发油的提取,采用DB-17石英毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)；检测器为氢火焰离子检测器(FID)；进样口温度为230℃；检测器温度为250℃；升温程序为起始温度50℃,以2℃·min-1升至80℃,再以10℃·min-1升至240℃,保持10 min；载气为氮气,流速为1.2 mL·min-1；进样方式为分流进样,分流比为10：1。α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、柠檬烯、6-甲基-5-庚烯-2-酮和柠檬醛的线性范围分别为0.01829～0.914 mg·mL-1(r=0.999 9),0.00992～0.4960 mg·mL-1(r=0.9999),0.00956～0.4780 mg·mL-1(r=0.9999),0.1013～5.064 mg·mL-1；(r=1.0),0.0947～4.734 mg·mL-1(r=0.9999)和0.1461～7.350 mg·mL-1(r=0.9999)；平均回收率(n=9)分别为99.2%(RSD=3.1%),99.0%(RSD=3.2%),100.5%(RSD=3.3%),100.4%(RSD=1.4%),99.1%(RSD=1.7%)和97.7%(RSD=2.6%)。结果表明,该方法简单、准确、可靠,为荜澄茄的质量控制提供了方法。 本研究首次建立了荜澄茄高效液相色谱指纹图谱研究方法。采用Promosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液进行梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254和268 nm。对16批荜澄茄样品色谱指纹图谱进行分析,获得14个共有峰,并对其中的芦丁、异东莨菪内酯、柠檬醛a和柠檬醛b色谱峰进行了指认。采用组间均联法(between-groups linkage),以余弦(cosine)作为样品相似性的测度,将16批样品聚类分析成2类,结合形态学鉴定结果,判断第Ⅰ类为推荐品,依据推荐品药材的图谱建立共有模式,计算各产地样品相似度。