本试验运用液体深层发酵技术制备羊肚菌菌丝体,并对多糖的测定方法进行了研究,分别利用超声波提取法和超滤浓缩纯化法成功得从羊肚菌中提取了胞内多糖和胞外多糖并确定了其最佳提取工艺条件。最后,将提取出的水溶性多糖进行纯化,分离工作的研究。
在多糖的测定方法方面,由于在实验中发现受到发酵液中夹带的糖类物质(如淀粉,蔗糖)等物质的干扰,其有效羊肚菌胞外多糖的含量测定会受到较大影响。国内报道测定食用菌胞外多糖的方法中几乎没有提到杂带多糖对结果的影响。因此,本实验对这一问题进行了研究,分别以传统的苯酚-硫酸法和改进的ROBERTS铜方法进行羊肚菌胞外多糖测定,实验表明用ROBERTS铜法所测多糖含量仅占苯酚硫酸法所测多糖含量的17.3%,证明用ROBERTS铜法测定羊肚菌胞外多糖更准确一些。运用超声波提取技术研究了羊肚菌菌丝体多糖的提取。试验在单因素实验基础上采用正交试验研究了羊肚菌多糖最佳的超声波提取方法,确定的优化条件为:提取时间20 min,料液比(g∶mL)1: 10,超声波功率960 W,提取次数2次,在此条件下样品中羊肚菌多糖提取量为1.14%。超声波浸提法可以有效地降低提取温度,缩短提取时间,节约能源成本和时间。
运用超滤技术研究了膜装置在羊肚菌胞外多糖浓缩纯化过程中的应用,确定超滤技术在羊肚菌胞外多糖浓缩纯化过程中的最佳条件。以截留率和膜通量为参数,分别从超滤膜大小,超滤压力,超滤温度三个因素优选出最佳超滤条件。结果发现羊肚菌胞外多糖的最佳超滤条件为:采用截留分子量为10KDa的超滤膜,超滤压力为0.100Mpa,超滤温度为20℃。在此条件下,胞外多糖截留率可达到95.72%。
最后对羊肚菌菌丝体和发酵液中提取的多糖进行分离、纯化和组成分析。提取出的粗多糖用sevage法反复脱蛋白,经DEAE-52阴离子纤维素色谱、Sephadex-100凝胶过滤色谱等方法进一步分离纯化,高效凝胶过滤法(HPGPC)鉴定纯度及相对分子质量,红外光谱IR分析多糖的比旋光度和化学组成。结果从羊肚菌发酵液中提取得三种多糖(PW1 ,PW2和PW3),从羊肚菌菌丝体中提取出两种多糖(PN1, PN2).其中PW1、PW2、PN1、PN2经凝胶过滤色谱证明为均一多糖并确定其分子量分别为13062、44259、39537和8300。
