在抗击流感中金银花起到了至关重要的作用,而金银花和山银花属于中药“一药多基原”现象,药典中对于二者功效描述相同,这会导致金银花和山银花在临床和制药上使用混乱,而关于金银花和山银花的抗病毒功效差异尚未见报道,故本课题以金银花和四种基原山银花主产区药材为研究对象,通过对流感病毒小鼠的死亡保护作用,肺组织炎症抑制作用,免疫器官指数,T细胞亚群,脾淋巴细胞增殖能力,免疫球蛋白和细胞因子含量的影响,阐明金银花及山银花抗流感病毒功效差异及其作用机制,并综合评价金银花和山银花的抗病毒功效,主要研究成果如下:1.本课题通过鸡胚增殖流感病毒FMl株,测定病毒对小鼠的LD50是10-3.2/50μL。用鸡胚传代的病毒感染ICR小鼠,测定金银花及山银花对甲型流感病毒肺炎小鼠的死亡保护率,发现金银花及不同基原山银花对流感病毒感染小鼠的平均生存天数有一定程度的提高,但无显著性差异,各药物组对流感病毒感染小鼠的死亡保护率由高到低依次是:华南忍冬,黄褐毛忍冬,红腺忍冬,灰毡毛忍冬,金银花。2.就肺指数而言,金银花对肺指数的升高有显著性抑制作用(P<0.05),其他药物组均有不同程度的降低,各组肺指数由低到高依次是金银花,灰毡毛忍冬,红腺忍冬,华南忍冬,黄褐毛忍冬,猜测小鼠肺部炎症已经在恢复中。测定感染小鼠肺组织病毒血凝滴度,结果显示只有病毒组小鼠肺组织有血凝现象发生,可以看出药物均对流感病毒的抑制和杀灭作用。通过对流感病毒感染小鼠的肺组织病理切片观察,药物组肺组织病变有明显改善,偶见炎性细胞浸润,灶性分布的病理改变消失,各药物组之间肺部炎症改善无明显差异,由此证明,金银花和山银花对流感病毒肺炎小鼠的肺组织炎症有较好的改善作用,差异不显著。3.采用AnnxinV-FITC/PI双染法测定金银花及山银花对流感病毒感染小鼠的肺组织细胞凋亡作用,发现红腺忍冬在较大程度上降低流感病毒肺炎小鼠肺组织细胞凋亡率,无显著性差异,各药物组肺组织细胞凋亡百分比由低到高依次是:红腺忍冬,华南忍冬,黄褐毛忍冬,灰毡毛忍冬,金银花,尤其是红腺忍冬组凋亡率和利巴韦林组没有显著性差异。4.本课题中金银花和山银花对病毒感染小鼠的免疫功能的影响主要表现在以下几方面:(1)免疫器官指数:金银花能显著增加感染小鼠的脾指数,各药物组对流感病毒小鼠胸腺指数的增加均有显著性差异。(2)T淋巴细胞亚群:红腺忍冬和华南忍冬CD4+T细胞百分比显著高于病毒组,(P<0.01),从CD8+T细胞百分比看,各药物组均降低,从CD4+/CD8+T细胞百分比看,各药物组均有不同程度的上升,无显著性差异,CD4+/CD8+T细胞百分比由高到低依次为:红腺忍冬组,华南忍冬组,金银花组,灰毡毛忍冬组,黄褐毛忍冬组,总体来看,红腺忍冬和华南忍冬更好地促进了这两个T细胞亚群恢复平衡状态。(3)脾淋巴细胞增殖能力:灰毡毛忍冬对流感病毒感染小鼠的脾淋巴细胞增殖有显著的增强作用(P<0.05),各药物组对流感病毒肺炎小鼠脾淋巴细胞增殖能力大小由高到低依次是:灰毡毛忍冬,红腺忍冬,华南忍冬,金银花,黄褐毛忍冬。(4)细胞因子和免疫球蛋白:红腺忍冬对IgG含量有显著性提高(P<0.05),其余药物组均有不同程度的提高;红腺忍冬、黄褐毛忍冬和灰毡毛忍冬能显著抑制流感病毒肺炎小鼠IFN-y水平的升高(P<0.05),红腺忍冬,华南忍冬,黄褐毛忍冬和金银花对感染病毒小鼠的IL-1β含量的升高具有显著性抑制作用(P<0.05),减轻炎性因子对肺组织炎症的损伤,对肺组织炎症有一定程度的改善作用。5.通过偏最小二乘法进行谱效关系分析,经质谱研究鉴定发现,金银花和山银花的抗病毒药效物质基础包含有绿原酸,咖啡酸,木犀草苷,异绿原酸A,金丝桃苷,异绿原酸C这6种物质,主要是黄酮类和有机酸类物质起抗病毒作用。
