鸡枞菌子实体多糖分离纯化与结构分析及抗肿瘤活性研究

鸡枞菌含多种营养成分和药用成分，具有很高的食药用价值。目前对鸡枞菌的研究主要集中在鸡枞菌的驯化栽培和菌丝体的培养，鸡枞菌多糖的研究目前还停留在提取工艺上，其在结构分析、构效关系以及具体功能上研究甚少，本文系统开展了鸡枞菌子实体多糖的提取、分离、纯化、结构鉴定和抑制癌细胞增殖作用等方面的研究。主要研究结果如下： 经过检测得到鸡枞菌子实体干品中的粗蛋白、总糖、粗脂肪、粗纤维、灰分、水分含量分别为：32.82%、26.79%、4.40%、6.38%、7.02%、13.08%。 考察了水提醇沉法浸提鸡枞菌子实体多糖，优化了提取工艺。单因素实验结果表明，最佳提取温度、最佳液固比、最佳提取时间分别为80℃或90℃、30:1、3h，在以上条件下第二次和第三次得率非常低，分别只有1.01%、0.39%。在单因素实验基础上采用响应面分析法优化工艺条件，得到修正后最佳工艺条件：提取温度87℃、提取时间2.9h、水料比31:1（mL/g），得率能达到16.88%。 最佳工艺条件下提取鸡枞菌子实体多糖，经过脱色、醇沉、脱蛋白后得到鸡枞菌子实体的粗多糖TAP，TAP经过DEAE-52离子交换柱层析和100KD超滤管离心后得到纯化多糖TAPⅠ、TAPⅡ-2以及TAPⅡ-1和TAPⅡ-2混合组分，经过凝胶渗透色谱和SepharoseCL-6B凝胶柱层析鉴定TAPⅠ、TAPⅡ-2为均一成分，其重均相对分子质量分别为14656、16544，TAPⅡ-1的重均相对分子质量为1958484。 分析了TAPⅠ的初级结构。TAPⅠ在260nm、280nm的紫外扫描没有信号，说明其中不含蛋白质和核酸；红外光谱显示TAPⅠ具有多糖的特征吸收峰，3412cm-1处的O–H伸缩振动，2930cm-1处C–H的伸缩振动，1651cm-1处C=O非对称伸缩振动峰，1422cm-1处C-H变角振动吸收峰，存在吡喃环同时也显示甘露糖存在；单糖组成分析结果表明TAPⅠ含岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，摩尔比为：岩藻糖︰甘露糖︰葡萄糖︰半乳糖=1︰1.38︰2.47︰3.08；高碘酸氧化和Smith降解显示TAPⅠ中含有1→6、1→和1→2、1→4以及1→3型糖苷键，其中全部岩藻糖、非常大量的半乳糖和部分葡萄糖能被氧化，应为1→6或1→或1→2或1→4，甘露糖和少量葡萄糖不能被氧化应为1→3型糖苷键；核磁共振显示TAPⅠ中含α、β两种糖苷构型，推测有6种糖残基重复单元，同时验证了岩藻糖残基的存在，主链键型为α–（1→3）和α–（1→2）。 采用MTT法检测了鸡枞菌子实体多糖在体外对人体肝癌Hep G2细胞和膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用。结果发现鸡枞菌子实体粗多糖TAP和经过纯化的多糖TAPⅠ、TAPⅡ-2以及TAPⅡ-1和TAPⅡ-2的混合物对人体肝癌Hep G2细胞均有抑制效果，且整体呈剂量依赖性，其中纯多糖TAPⅡ-1抑制效果最好，抑制率能达到64.01%；而对人体膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用，这几种多糖的抑制效果整体较差，只有部分多糖组分在低浓度时呈现了较显著的抑制效果。