姬松茸(Agaricus blazei Murill)又名巴西蘑菇、小松菇,是一种食药兼用的珍稀食用菌。姬松茸多糖的生物学活性主要包括抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗疲劳和提高机体免疫力等。有机锗的生物学功能主要包括抗衰老、抗肿瘤、造血功能、降血脂和提高机体免疫力等。
本课题通过Plackett-Burman (PB)和响应而(response surface methodology, RSM)等试验对姬松茸胞外多糖(extracellular polysaccharide, EPS)、胞内多糖(intracellular polysaccharide,IPS)和胞内锗多糖(intracellular germanium polysaccharide, IGPS)分别进行了提取条件优化和抗衰老活性试验。对三种多糖进行了组分分离,并测定了多糖组分的体外抗氧化活性、单糖组成及化学结构。
(1)三种姬松茸多糖的提取条件优化
通过PB试验,分别确定了对姬松茸多糖得率影响最显著的三个因素,RSM试验结果表明,在各自最优提取条件下,EPS的理论得率为1145.87mg/L,IPS为7.52%,IGPS为7.16%；实际得率分别为EPS1127.23mg/L,IPS7.46%,IGPS7.12%。
(2)姬松茸多糖组分的分离纯化
经过DEAE-纤维素和葡聚糖G-100凝胶的分离,EPS得到组分EPS-1-1、EPS-1-2和EPS-2；IPS得致组分IPS-1和IPS-2；IGPS得到组分IGPS-1、IGPS-2-1、IGPS-2-2、IGPS-3-1和IGPS-3-2。
(3)姬松茸多糖组分的体外抗氧化活性
EPS-2在浓度为200mg/L时,对DPPH、羟基自由基的清除率分别为32.96±1.65%和96.26±4.81%,还原力为0.98±0.05,表明EPS-2具有较强的体外抗氧化活性；IPS-2在1000mg/L时对DPPH、羟基自由基的清除率分别为35.94±1.80%和41.2±2.06%,还原力为0.53±0.03,表明IPS-2具有较强的体外抗氧化活性；IGPS-3-1在1000mg/L时对DPPH、羟基自由基的清除率分别为46.07±2.30%和61.16±3.06%,还原力为0.60±0.03,表明IGPS-3-1也具有较强的体外抗氧化活性。
(4)姬松茸多糖的抗衰老活性
结果表明,EPS、IPS和IGPS均能明显提高小鼠肝脏组织中T-AOC水平,降低肝脏组织MDA含量和血液中ALT活性。与模型组相比,多糖试验组结果均达到极显著水平,表明EPS、IPS和IGPS都具有较强的抗衰老活性。
(5)姬松茸多糖组分的单糖组成及摩尔比
气相色谱法测定了EPS-2、IPS-2和IGPS-3-1单糖组成及摩尔比,结果显示EPS-2的单糖组成为鼠李糖、甘露糖和葡萄糖,其摩尔比为1.3：1：2；IPS-2的单糖组成为鼠李糖和甘露糖,其摩尔比为1.4：1；IGPS-3-1的单糖组成为鼠李糖、甘露糖和葡萄糖,其摩尔比为1.07：1：1.43。
(6)姬松茸多糖组分的化学结构测定
通过红外光谱法对EPS-2、IPS-2和IGPS-3-1在4000-400cm-’区段进行扫描,结果显示,三种多糖均为D-吡喃型。
