实验目的:探讨湿阻中焦证大鼠模型对葡萄糖代谢中无氧酵解及糖异生的影响。揭示湿阻中焦证机体物质代谢和能量代谢失衡的部分分子机制、脾胃调控葡萄糖代谢无氧酵解及糖异生方面的作用靶点、平胃散与藿香正气散的干预作用以及简单对比。实验方法:采用前期成熟的湿阻中焦证的造模方法,建立湿阻中焦证动物模型。选取间苯三酚法检测血清中D-木糖含量,肝脏Na+-K+-ATP酶活性以化学比色法检测,血清、肝脏及肌肉中葡萄糖含量以过氧化物酶法检测,化学方法检测肝脏组织中蛋白、丙酮酸、乳酸、肝糖原含量及血清中乳酸、胰岛素、胰高血糖素含量及肌肉当中的乳酸、肌糖原含量;ELISA法检测肝脏组织中己糖激酶、丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶-1、2,6-双磷酸果糖、乙酰辅酶A、丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、葡萄糖-6-磷酸酶及肌肉当中的乳酸脱氢酶与丙酮酸含量;高效液相色谱技术检测ATP含量。实验结果:1湿阻中焦证模型的建立（1）通过一般情况观察,与空白组相比,模型组大鼠体重、饮食均明显降低,精神状态较差。（2）客观指标检测,模型组大鼠胃排空迟缓,血清D-木糖含量及Na+-K+-ATP酶活力均下降。（3）经平胃散、藿香正气散干预治疗后,模型组大鼠体重、精神状态、胃残留率、肠推进率、血清D-木糖吸收率和Na+-K+-ATP酶活性均得到改善。湿阻中焦证模型大鼠造模成功。2湿阻中焦大鼠葡萄糖、糖原、ATP及相关因子的变化造模后,与空白组相比,模型组大鼠血清及肝脏组织中葡萄糖、肝糖原、肝脏组织ATP及肌肉组织中葡萄糖含量显著升高,而血清中胰岛素、胰高血糖素含量及胰岛素与胰高血糖素的比值有降低趋势,肌糖原无明显变化。与模型组相比,自然恢复组血清及肝脏组织当中葡萄糖、肝糖原、肝脏组织ATP及肌肉组织中葡萄糖含量显著降低,血清中胰岛素、胰高血糖素含量及胰岛素与胰高血糖素的比值持续降低,肌糖原无明显变化,其中ATP自然恢复组含量高于空白组水平。平胃散干预后,大鼠肌糖原含量升高,肝脏组织中的葡萄糖、ATP、肝糖原及肌肉组织中葡萄糖含量均降低明显,其中肌肉组织葡萄糖平胃散各剂量组、肝糖原平胃散低剂量组、血清葡萄糖平胃散中剂量组及低剂量组水平均低于空白组;胰岛素与胰高血糖素比值减小且与给药剂量大小呈正相关,其中胰岛素与胰高血糖素比值平胃散中、低剂量组水平均低于空白组;大鼠血清中胰岛素、胰高血糖素含量持续降低,二者变化趋势一致且以平胃散低剂量降低最为明显。藿香正气散干预后,大鼠血清中葡萄糖、胰高血糖素、肝糖原、肝脏组织ATP含量降低,肌肉组织葡萄糖含量变化不明显,而肝脏组织葡萄糖含量减小且与给药剂量大小呈负相关,肌糖原、胰岛素含量及胰岛素与胰高血糖素比值均升高,其中肝糖原、血清葡萄糖藿香正气散干预后各组水平均低于空白组,胰岛素藿香正气散中剂量组及低剂量组、胰岛素与胰高血糖素比值藿香正气散各给药组水平均高于空白组。3.湿阻中焦大鼠肝脏丙酮酸含量的变化造模后,模型组肝组织丙酮酸含量较空白组显著降低;与模型组比较,自然恢复组肝脏组织丙酮酸含量升高到与空白组水平相近。平胃散干预后,肝脏组织丙酮酸含量升高,其中平胃散高剂量组及平胃散低剂量组水平高于空白组;藿香正气散干预后,肝脏组织丙酮酸含量升高,各组水平均高于空白组。4.湿阻中焦大鼠无氧酵解相关因子的变化4.1湿阻中焦大鼠无氧酵解相关因子的变化造模后,模型组大鼠肝脏组织中己糖激酶、丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶-1、2,6-双磷酸果糖含量较空白组均降低或呈降低趋势;与模型组比较,自然恢复组肝脏组织己糖激酶、丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶-1、2,6-双磷酸果糖含量均升高,其中丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶-1、2,6-双磷酸果糖自然恢复组含量高于空白组。平胃散干预后,肝脏组织己糖激酶含量降低且与给药剂量大小呈负相关,而丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶-1、2,6-双磷酸果糖自然恢复组含量升高,且水平高于空白组;藿香正气散干预后,肝脏组织己糖激酶、2,6-双磷酸果糖含量升高,且水平高于空白组,丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶-1含量降低。4.2湿阻中焦大鼠乳酸循环相关因子的变化造模后,与空白组相比,模型组大鼠肝脏和肌肉当中的乳酸含量升高,血清当中的乳酸含量降低;肌肉组织中丙酮酸和乳酸脱氢酶含量降低,肝脏组织中乳酸脱氢酶含量降低;与模型组比较,自然恢复组肌肉组织中丙酮酸、乳酸脱氢酶、血清中乳酸及肝脏组织中乳酸脱氢酶含量均升高,肝脏组织和肌肉组织中乳酸含量均降低,其中肝脏组织和肌肉组织中乳酸脱氢酶含量高于空白组,肌肉组织中乳酸含量低于空白组水平。经平胃散干预后,与模型组比较,肝脏和血清中的乳酸含量升高,肌肉中的乳酸含量、丙酮酸含量均降低,肝脏与肌肉组织中乳酸脱氢酶含量升高;经藿香正气散干预后,与模型组比较,血清中乳酸含量升高,肝脏、肌肉中乳酸含量降低,肌肉组织丙酮酸含量降低、乳酸脱氢酶含量升高,肝脏组织乳酸脱氢酶含量升高。5.湿阻中焦大鼠糖异生途径中相关因子的变化造模后,与空白组相比,模型组大鼠肝脏组织丙酮酸羧化酶含量升高、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶含量降低,葡萄糖-6-磷酸酶含量无明显变化趋于稳定;与模型组比较,自然恢复组肝脏组织丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶含量升高,葡萄糖-6-磷酸酶含量仍无明显变化。平胃散及藿香正气散干预后,肝脏组织丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、葡萄糖-6-磷酸酶含量均升高。实验结论:湿阻中焦证模型可以影响肝脏葡萄糖代谢无氧酵解与糖异生的部分相关因子,这可能是湿阻中焦证导致机体物质代谢与能量代谢失衡的机制之一;平胃散、藿香正气散能够不同程度改善湿阻中焦证模型肝脏葡萄糖代谢无氧酵解与糖异生部分因子的状态,参与机体物质代谢和能量代谢的输布与调控,这可能是脾胃调控葡萄糖无氧代谢方面的作用靶点及平胃散燥湿和胃、藿香正气散化湿和中的作用机制之一。平胃散和藿香正气散对湿阻中焦的作用趋势一致,但侧重不同。
