平喘宁调节寒哮大鼠肺组织EGF、RAF、ERK2、P-ERK2、MEK2、C-JUN干预气道重塑的研究

目的:研究平喘宁对寒哮大鼠肺组织中ERK信号通路中EGF、ERK2、P-ERK2、MEK2、C-JUN、RAF相关蛋白以及C-JUNm RNA表达水平的影响,探讨平喘宁干预哮喘气道重塑的作用机制。方法:雄性SD大鼠,140只,随机分为正常组、模型组、平喘宁大剂量组、平喘宁中剂量组,平喘宁小剂量组,桂龙咳喘宁组、地塞米松组,每组20只。第1、8d采用大鼠腹腔注射10%卵蛋白、氢氧化铝、生理盐水混悬液1 ml致敏。第15d起用1%卵蛋白溶液超声雾化并给与寒冷刺激,30 min·次·d-1,连续7d。造模第21d开始,大鼠灌胃给药,连续给药28d。正常组、模型组每天给予等量蒸馏水灌服,地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁大、中、小剂量组按人体与大鼠体表面积换算比折算剂量灌胃。连续给药28d后,在末次卵蛋白激发后2h内,解剖大鼠,取出右肺组织冻存,左肺固定备用。采用HE染色法检测实验后肺组织的病理学改变;采用Sq RT-PCR法检测实验后肺组织中C-JUN m RNA的表达丰度;采用Wersten blot法检测实验后肺组织中EGF、ERK2、P-ERK2、MEK2、C-JUN、RAF的相对表达量。结果:通过HE染色后可以发现,与正常组相比,模型组有明显气道重塑现象;与模型组相比,各治疗组气道重塑均得到不同程度的抑制。通过Western Blot检测发现,与正常组相比,EGF平喘宁大剂量组无特异性变化(P>0.05),其他各组蛋白的表达均有增高(P<0.01);RAF模型组和桂龙咳喘宁组蛋白表达增高(P<0.01、P<0.05),其余各组无明显变化;MEK2平喘宁大、中剂量组无特异性变化(P>0.05),其他各组蛋白的表达均显著增高(P<0.01);P-ERK2和ERK2模型组、桂龙咳喘宁组、平喘宁小剂量组、地塞米松组蛋白的表达均有增高(P<0.01、P<0.05),其他组别无统计学意义;C-JUN除平喘宁中剂量组无特异性变化(P>0.05),其他各组蛋白的表达均有增高(P<0.01)。而与模型组相比,RAF、MEK2、ERK2、C-JUN除了与桂龙咳喘宁组、地塞米松组、平喘宁小剂量组中蛋白的表达均有下降(P<0.01、P<0.05),其他组别无统计学意义;EGF除桂龙咳喘宁组无统计学意义,其他各组中蛋白的表达均有下降(P<0.01、P<0.05);P-ERK2除桂龙咳喘宁组、平喘宁小剂量组无统计学意义,其他各组中蛋白的表达均有下降(P<0.01、P<0.05);C-JUN除平喘宁中剂量组无特异性变化(P>0.05),其他各组中蛋白的表达均有下降(P<0.01、P<0.05)。通过Sq RT-PCR检测发现,与正常组相比,各组C-JUNm RNA的表达均有增高(P<0.01);而与模型组相比,除平喘宁大、中剂量组中的基因表达均有下降(P<0.01),其他组别无统计学意义。结论:平喘宁大、中剂量组可以通过降低寒哮大鼠肺组织中EGF、ERK2、P-ERK2、MEK2、MEK2、C-JUN、RAF、C-JUNm RNA的表达,减轻寒哮大鼠气道炎症反应,延缓气道重塑而治疗哮喘。