市售椰子汁(植物蛋白饮料)中椰子、大豆、花生源性成分鉴定的分子生物学方法附视频

为建立市售椰子汁饮料产品中目的种源成分(椰子)和非目的种源成分(大豆、花生)的分子生物学检测鉴定方法。本研究代表性抽取了6批次市售主流品牌椰子植物蛋白汁饮料,提取各样本DNA,通过扩增基因组ITSⅡ片段验证核酸提取效果。之后利用PCR方法检测了样本中椰子种源成分并同时比较了椰子的稳定持家基因eEF1-α和UBC10扩增效果(Xia et al., 2014),发现所有检测样本均可检出椰子成分,并且UBC1O基因更适用于椰子汁这类工业化产品的靶向扩增。另利用实时荧光PCR验证大豆、花生等的源性成分引物、探针特异性,发现6个种源间无交叉反应,无非特异性扩增曲线。在实际样本检测中,实时荧光PCR显示6份样本中无花生源性成分检出;3#和6#样本有大豆成分检出,Ct值分别为33.89和38.15,6#样本经重复实验分析无明显差异,表明在2份椰子汁中检出非目的种源—大豆。考虑到6#样本为弱阳性,故采用特异性、灵敏度更好的微滴式数字PCR (dd PCR)检测并验证前期结论,分析显示在实时荧光PCR中有扩增的2份样本中,3#样本检出大豆阳性微滴信号,6#则为阴性,其余4份样本dd PCR与实时荧光PCR一致,均为阴性。本次实验筛选了更适合扩增椰子植物蛋白饮料DNA的靶基因,建立了此类产品中2个种源鉴定的实时荧光PCR方法,并通过先进的dd PCR法对可疑结果进行验证的完整解决方案,最终避免了假阳性结论,判定这6份市售产品中有1份样本存在掺杂使假。这项工作为监管部门提供了有效的监管手段和技术支撑,将有助于进一步规范椰子汁市场和质量安全。