正交设计优化果梅ISSR反应体系

被引：45

作者：

桂腾琴 ^{[1
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孙敏 ^{[2
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乔爱民 ^{[4
]}

王心燕 ^{[4
]}

机构：

[1] 黔西南民族师范高等专科学校化学生物系

[2] 西南大学生命科学学院

[3] 三峡库区生态环境教育部重点实验室

[4] 仲恺农业技术学院农业与园林学院

来源：

果树学报 | 2009年 / 26卷 / 01期

基金：

广东省科技计划;

关键词：

果梅; 简单序列重复区间(ISSR); 正交设计; 反应体系;

D O I：

10.13925/j.cnki.gsxb.2009.01.023

中图分类号：

S662.4 [梅];

学科分类号：

摘要：

以果梅(PrunusmumeSieb.etZucc.)品种鸳鸯梅为试材,采用改良的CTAB法提取果梅嫩叶DNA,利用正交设计L16(45)探讨Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量对果梅ISSR-PCR反应的影响,正交试验的结果采用直观分析和方差分析相结合。建立了果梅的ISSR-PCR优化反应体系,在20μL反应体系中含2μL10×Buffer,2.5mmol·L-1Mg2+,0.2mmol·L-1dNTPs,0.32μmol·L-1引物,20～80ng模板DNA,0.75UTaqDNA聚合酶。在此基础上探讨了引物UBC840的最适退火温度、最佳循环次数及延伸时间,引物UBC840的最适退火温度为50.6℃。应用该优化反应体系,用2个不同引物对19份果梅资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的稳定性。

引用

页码：108 / 112

页数：5

共 12 条

[1] Molecular marker based genetic diversity analysis of Curcuma species from India [J].