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甜槠ISSR-PCR反应体系的正交优化
被引：6
作者：
张文标
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金则新
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李钧敏
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潘冠琼
[2
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机构：
[1] 西南师范大学三峡库区生态环境教育部重点实验室
[2] 台州学院生态研究所
来源：
基金：
浙江省自然科学基金;
关键词：
植物学;
ISSR-PCR;
正交设计;
优化;
甜槠;
D O I：
暂无
中图分类号：
S792.17 [锥栗（栲、槠）];
学科分类号：
摘要：
对甜槠Castanopsis eyrei进行遗传多样性研究的过程中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,利用正交设计对Mg2+,dNTP,引物,Taq酶,牛血清蛋白(BSA)和模板DNA等6种因素5个水平进行筛选和优化。确定甜槠ISSR-PCR最适宜反应体系为:10μL反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris-HCl,pH 9.0,50 mmol.L-1KCl,10 g.L-1TritonX-100),1.7 mmol.L-1Mg2+,0.25 mmol.L-1dNTP,8.34 nkatTaqDNA聚合酶,1.5 g.L-1牛血清白蛋白,6 pmol引物,12 ng模板DNA。甜槠扩增时引物UBC846的最适退火温度为56.3℃。图2表1参23
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