利用pGhost系统筛选抗后酸化保加利亚乳杆菌

目的:利用p Ghost系统构建抗后酸化保加利亚乳杆菌。方法:利用载体p Ghost9:ISS1经复制型转座构建突变体,之后在p H 4.3条件下,突变细胞用含终质量浓度2 000μg/m L青霉素处理5 h。将处理后的菌液涂布在含终质量浓度2μg/m L红霉素的MRS平板上,长出的菌落分别点种p H 4.3和p H 6.5的MRS平板进行筛选,在低p H值条件下生长不良或不生长的菌株即目的菌株。经进一步检验,筛选发酵性能与出发菌株相当,而贮藏期后酸化能力大为减弱的菌株。将筛选出的抗后酸化菌株通过低温刺激,使转座后的载体重组,载体部分从染色体上切除,并经高温培养后丢失。剔除载体后的突变型菌落是食品级突变体,为红霉素敏感型。结果:获得3株抗后酸化保加利亚乳杆菌菌株,其生物学性状稳定,回复突变率低。