康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在毕赤酵母中的表达研究

被引：4

作者：

黄时海 ^{[1
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李湘萍 ^{[2
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康超 ^{[1
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黄飞 ^{[3
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汪晟 ^{[1
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吴孔阳 ^{[1
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曹喜秀 ^{[1
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曹普美 ^{[1
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何鑫平 ^{[1
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梁智群 ^{[1
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机构：

[1] 广西大学生命科学与技术学院

[2] 广西大学动物繁殖研究所

[3] 南宁新技术创业者中心

来源：

酿酒科技 | 2011年 / 01期

关键词：

微生物; 康氏木霉; 毕赤酵母; cbhI基因; 表达;

D O I：

10.13746/j.njkj.2011.01.001

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

在毕赤酵母中表达康氏木霉(Trichoderma koningii)纤维素酶基因cbhI。提取经诱导的康氏木霉mRNA,通过反转录及PCR反应扩增纤维素酶cbhI基因cDNA。将cbhI基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,采用电激法将经SacⅠ线性化的重组质粒pPICZαA-cbhI转化毕赤酵母GS115,MD及G418抗性平板筛选cbhI基因高拷贝转化子,并用PCR鉴定转化子。BMMY培养基中加入0.5%甲醇对毕赤酵母进行纤维素酶CBHI诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示,表达的重组蛋白相对分子质量约67 kD,pNPC酶活为24.1 U/L,酶蛋白量为0.22 mg/mL,表明,康氏木霉cbhI可以在毕赤酵母中表达,并具有较高活性。

引用

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页数：4

共 13 条

[1] 长梗木霉外切纤维素酶CBH Ⅱ基因的克隆及表达 [J].