柴胡加龙骨牡蛎汤对帕金森病伴发抑郁模型大鼠的神经保护作用及对AMPK/mTOR信号通路的影响

目的：观察柴胡加龙骨牡蛎汤（CLMT）对帕金森病伴发抑郁（PDD）模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用，并基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（AMPK/m TOR）信号通路探讨其作用机制。方法：80只雄性SD大鼠，随机选取10只作为正常组，其余采用长期低剂量颈背部皮下注射鱼藤酮联合慢性不可预见性温和应激（CUM）建立PDD大鼠模型，将造模成功的PDD大鼠随机分为模型组、西药组(多巴丝肼0.032 g·kg-1+盐酸氟西汀0.002 g·kg-1)、CLMT低、中、高剂量组(5、10、20 g·kg-1)，每组10只，正常组和模型组予以等体积生理盐水灌胃，连续4周。旷场实验、爬杆实验评估各组大鼠行为学变化；高效液相色谱法（HPCL）测定脑脊液中多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）含量；苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠黑质DA能神经元病理改变；免疫组化法（IHC）检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性表达；免疫荧光法（IF）检测黑质α-突触核蛋白（α-synuclein）表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测纹状体微管相关蛋白1轻链3（LC3）、AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）、m TOR、磷酸化m TOR（p-m TOR）蛋白表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠旷场实验水平运动总距离及中央区域活动时间均明显减少（P<0.05,P<0.01），爬杆时间明显缩短（P<0.01），评分升高（P<0.01），脑脊液中DA、5-HT含量减少（P<0.05,P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组水平运动总距离明显增加及中央区域活动时间均增加（P<0.05,P<0.01），爬杆时间延长（P<0.05），评分下降（P<0.05,P<0.01）,DA及5-HT含量增加（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较，模型组大鼠黑质DA能神经元数量明显减少，胞体缩小且排列疏松，α-synuclein荧光表达显著增强（P<0.01）,TH阳性表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组黑质DA能神经元数量增加，胞体增大，α-synuclein荧光表达明显减弱（P<0.05,P<0.01）,TH表达显著增加（P<0.01）。与正常组比较，模型组纹状体LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达明显降低（P<0.05,P<0.01）、p-m TOR/m TOR表达显著增加（P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达均明显增加（P<0.05,P<0.01）、p-m TOR/m TOR表达显著降低（P<0.01）。结论：CLMT可抑制鱼藤酮神经毒性，发挥神经保护作用，提高DA水平，从而改善帕金森病大鼠抑郁状态，其机制可能与调控AMPK/m TOR信号通路，激活自噬，促进异常聚集的α-synuclein降解有关。