实时荧光定量PCR法快速检测食品中大肠埃希菌

被引：3

作者：

胡朝友 ^{[1
]}

洪志强 ^{[1
]}

张梦寒 ^{[2
]}

机构：

[1] 昆山市疾病预防控制中心

[2] 苏州市疾病预防控制中心

来源：

中国食品卫生杂志 | 2015年 / 27卷 / 04期

关键词：

大肠埃希菌; 实时荧光定量PCR; 定量检测; 食源性致病菌; 食品安全; 风险监测;

D O I：

10.13590/j.cjfh.2015.04.011

中图分类号：

R155.5 [食品卫生与检验];

学科分类号：

100403 ;

摘要：

目的应用实时荧光定量PCR技术,结合3～5 h的前增菌处理,建立食品中大肠埃希菌的快速、灵敏、定量的检测方法。方法以大肠埃希菌（ATCC 25922）为参考菌株,对培养基和培养温度进行优化,选择最佳的前增菌培养条件。将不同浓度的参考菌株和样品分别接种前增菌液中培养3～5 h。采用Triton-X 100提取增菌后的DNA,实时荧光定量PCR扩增大肠埃希菌特异性片段。所得Ct与对应的原始（增菌前）参考菌株的浓度,建立标准曲线,计算样品中大肠埃希菌的数量。结果纯培养模式下,经过3、4和5 h的前增菌后,标准曲线具有很好的线性,r2分别为0.996、0.992和0.991,对应的检测限为136、14和1.4 cfu/100 ml;含杂菌培养模式下,NB和EC肉汤42.0℃增菌4 h后,建立的标准曲线r2分别为0.972和0.978。在不同食品中该方法的加标回收率为74.0%174.0%。结论 3～5 h的前增菌实时荧光定量PCR方法可以快速、灵敏、定量地检测食品中活的大肠埃希菌。

引用

页码：399 / 403

页数：5

共 6 条

[1] TaqM an探针荧光PCR定量检测大肠埃希菌方法研究 [J].

胡朝友 ;

傅春玲 ;

陆巧荣 ;

张宏斌 .

现代预防医学, 2014, 41 (06) :1070-1073+1077

[2] 饮用水中大肠埃希菌富集和DNA提取方法优化 [J].

胡朝友 ;

傅春玲 ;

张宏斌 .

中国食品卫生杂志, 2014, 26 (01) :36-39

[3] 活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究 [J].

刘静宇 ;

凌莉 ;

邓翼惠 ;

易敏英 ;

胡科锋 ;

陈碧玲 .

中国食品卫生杂志, 2013, 25 (04) :309-315

[4] 食品安全微生物学指示菌国内外标准应用的比较分析 [J].

徐进 ;

庞璐 .

中国食品卫生杂志, 2011, 23 (05) :472-477

[5]

Polymerase chain reaction (PCR) detection of Listeria monocytogenes in diluted milk and reversal of PCR inhibition caused by calcium ions[J] . J.Bickley,J.K.Short,D.G.McDowell,H.C.Parkes. Letters in Applied Microbiology . 2008 (2)

[6] Reagent decontamination to eliminate false-positives in Escherichia coli qPCR [J].

Silkie, Sarah S. ;

Tolcher, Matthew P. ;

Nelson, Kara L. .

JOURNAL OF MICROBIOLOGICAL METHODS, 2008, 72 (03) :275-282

← 1 →