均匀设计在枇杷ISSR-PCR反应体系优化中的应用

被引：16

作者：

乔燕春 ^{[1
,2
]}

林顺权 ^{[1
]}

杨向晖 ^{[1
]}

刘月学 ^{[1
,2
]}

机构：

[1] 华南农业大学园艺学院

[2] 沈阳农业大学园艺学院

来源：

基因组学与应用生物学 | 2009年 / 28卷 / 01期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

枇杷; ISSR; 均匀设计; 体系优化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S667.3 [枇杷];

学科分类号：

090201 ;

摘要：

本实验通过U25(54)均匀设计实验研究,对枇杷ISSR-PCR分子标记体系中模板DNA、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物5个组分的浓度进行优化。获得25μL反应体系中各成分的适宜浓度或用量分别是:模板DNA为10ng、dNTPs为0.5mmol/L、Taq DNA聚合酶为1U、Mg2+为2.5mmol/L,引物为0.4μmol/L。与单因素梯度优化体系相比,操作简便,简化了实验步骤,获得的实验结果可靠,从100条ISSR引物中筛选出27条扩增良好的引物,并获得了这些引物的最佳退火温度,经琼脂糖凝胶电泳获得了清晰的图谱。这一优化体系的建立为进一步利用ISSR标记技术进行枇杷种质鉴定及遗传多样性分析提供了一个标准化程序。

引用

页码：123 / 126

页数：4

共 10 条

[1] SRAP分析体系的优化及在枇杷种质资源研究上的应用 [J].

乔燕春 ;

林顺权 ;

刘成明 ;

杨向晖 .

果树学报, 2008, (03) :348-352

[2] 均匀设计优化澳洲坚果SRAP反应体系 [J].

郭凌飞 ;

邹明宏 ;

杜丽清 ;

曾辉 ;

陆超忠 .

果树学报, 2008, (02) :250-253

[3] 柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系的建立与优化 [J].

吴鑫 ;

雷天刚 ;

何永睿 ;

刘小丰 ;

许兰珍 ;

彭爱红 ;

陈善春 .

分子植物育种, 2008, (01) :170-176

[4] 利用正交设计优化烟草SRAP反应体系 [J].

陈万胜 ;

王元英 ;

罗成刚 ;

杨爱国 ;

蒋彩虹 ;

范静苑 .

分子植物育种, 2008, (01) :177-182

[5] 枇杷属植物基因组DNA提取方法的改进及其应用 [J].

刘月学 ;

杨向晖 ;

林顺权 ;

胡桂兵 ;

刘成明 .

果树学报, 2005, (02) :182-185

[6] ISSR及其在果树上的应用 [J].

张青林 ;

罗正荣 .

果树学报, 2004, (01) :54-58

[7] 怀地黄ISSR扩增条件优化的研究(英文) [J].

周延清 ;

景建洲 ;

李振勇 ;

浩健 ;

贾敬芬 .

西北植物学报, 2004, (01) :6-11

[8] 均匀设计──一种试验设计方法 [J].

王元 .

科技导报, 1994, (05) :20-22

[9]

正交与均匀试验设计[M]. 科学出版社 , 方开泰,马长兴著, 2001

[10]

Genome fingerprinting by simple sequence repeats （SSR）-anchored polymerase chain reaction amplification. Zietkiewicz,E.,Rafalski,A.,Labuda,D. Genomics . 1994

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