水产品三种致病菌多重PCR检测方法的建立

根据副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的耐热直接溶血素基因(tdh)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的耐热核酸酶基因(nuc)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的侵入关联蛋白基因(iap)分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了对3种菌的多重PCR检测方法。结果表明:3对引物能特异性地扩增出202 bp、484 bp和714 bp的目的片段。优化后的多重PCR反应体系为:10×PCR buffer(Mg2+)2.5μL、200μmol/L dNTP、2 mmol/LMg2+、模板2μL、2.5 U Taq酶,引物浓度分别为:副溶血弧菌200 nmol/L、金黄色葡萄球菌40nmol/L、单增李斯特菌320 nmol/L,总反应液25μL。对贝类模拟样品的检测结果显示,应用多重PCR技术对3种菌的检测限分别为副溶血弧菌2.3×102CFU/mL、金黄色葡萄球菌2.5×101CFU/mL、单增李斯特菌1.5×103CFU/mL。作者通过多重PCR技术实现了对副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的同时检测,具有快速、灵敏度高、特异性强等优点。