Chelex法结合环介导间接聚合酶链式反应检测肉制品单增李斯特菌

目的:建立肉制品中单增李斯特菌环介导间接聚合酶链式反应检测体系,实现快速检测。方法:采用Chelex法从肉制品中分离模板DNA,根据单增李斯特菌hlyA基因的保守区设计两条探针,将探针标记于报告基因(大豆Lectin基因)的两端,此标记的报告基因与待测靶基因经杂交、缺口补平、环化后,采用反向聚合酶链式反应扩增报告基因,实现对靶基因的检测。结果:该检测体系检出限低于100CFU/g(mL),且与其他食源性致病菌的检测无明显交叉反应,对200份肉制品进行检测,阳性率为2.5%,与传统细菌分离检测结果完全相符。结论:环介导间接聚合酶链式反应可以快速、灵敏、特异检测肉制品中单增李斯特菌污染。