杜仲籽粕提取物抗骨质疏松的作用机制研究

绝经后骨质疏松症(PMOP)中免疫系统和骨的关系密切,雌激素缺乏下破骨细胞和成骨细胞的关系受到多条信号传导通路和细胞因子共同调节。本论文采用RealTime-PCR法检测桃叶珊瑚苷(AU)干预的成骨细胞的OPG及RANKL mRNA表达,Western blot法检测OPG及RANKL的蛋白表达,采用免疫组织化学染色检测了杜仲籽粕提取物(ESE)治疗28周的PMOP大鼠脾脏凋亡相关蛋白的表达以及子宫中雌激素受体的表达,采用ELISA方法检测血液、尿液生化指标,从整体动物、细胞、分子多水平上研究了杜仲籽粕防治PMOP的作用机制和药效物质,结果如下：1.体外培养原代成骨细胞,AU干预7天和14天后成骨细胞OPG mRNA的表达高于空白对照组(P<0.05),RANKL mRNA的表达均低于空白对照组(P<0.05),0.080 μM AU干预14天时差异最明显。2.与空白对照组相比,AU可升高成骨细胞OPG基因的转录水平(P<0.05),0.080 μM AU干预14天时OPG基因的转录水平达到最高。AU干预7天和14天后RANKL蛋白的表达均低于空白对照组(P<0.05)。3.灌胃给予PMOP模型大鼠不同剂量ESE 28周后,与模型组相比,中剂量ESE和大剂量ESE组动物尿液中的脱氧嘧啶磷、血中白介素-1和甲状旁腺激素水平的显著降低(P<0.05),降钙素水平显著升高(P<0.05),提示血中的钙移向骨质；免疫组化法分析Bcl-2和Bax蛋白的表达,结果ESE干预的大鼠脾脏中Bcl-2蛋白显著升高,Bax蛋白的表达显著降低,提示ESE能够保护机体免疫功能：免疫组化法分析大鼠子宫雌激素α、p受体均呈阳性表达；各给药组大鼠体重、血清中尿素、尿素氮、总胆红素、总甘油三脂、胆固醇的含量与模型组相比均无差异,提示ESE长期服用对PMOP大鼠的肝功和肾功无影响。结论：ESE能够调节PMOP模型大鼠的雌激素受体表达,保护免疫功能,维持免疫系统平衡。AU能够通过OPG/RANKL/RANK通路促进成骨细胞增殖和抑制骨吸收,表明杜仲籽粕抗骨质疏松的主要起效成分为AU。