硫酸化修饰对白术多糖理化性质及生物活性影响的研究

从中药白术根茎中提取水溶性白术粗多糖,粗多糖经冻融、醇沉分级,凝胶层析,蛋白酶法和Sevag法联合脱蛋白得到单一级分AMP,经HPLC测得平均分子量为8374Da。G.C分析表明其单糖组成为:Glc、Gal、Rha和Man,摩尔比为7.36:1.00:3.05:1.52,并对其进行了Sephadex G-75层析柱分析和HPLC分析,证明AMP为纯度较好的多糖样品,进而采用氯磺酸-吡啶法,制备得到三种不同硫酸化程度的白术多糖S1-AMP、S2-AMP、S3-AMP。 三种硫酸化白术多糖采用红外光谱,离子色谱,凝胶层析,比旋光度,核磁共振进行理化性质分析。结果表明,随着氯磺酸与多糖自由羟基摩尔比例的增加,硫酸化白术多糖的取代度随之增加;但当氯磺酸用量较高时,取代度提高的同时,产物收率降低,分子量减小。硫酸基的引入,使白术多糖分子的一级结构和高级结构都发生了变化,但没有改变白术多糖的构型。 通过APTT、PT检测抗凝血活性,结果表明白术多糖AMP没有抗凝血活性,而硫酸化白术多糖随着取代度的增加,S1-AMP,S2-AMP,S3-AMP的APTT、PT也随之增加,并且对浓度存在依赖关系,说明硫酸化白术多糖具有抗凝血作用,主要是影响内源性凝血途径,对外源性凝血途径影响较弱,仅在较大剂量时对PT有显著的延长作用。结构中的硫酸基是硫酸化白术多糖产生抗凝血活性的重要结构基团。 淋巴细胞转化实验表明:AMP和S1-AMP在体外具有促进小鼠脾淋巴细胞有增殖的作用,在一定浓度下均能协同有丝分裂原ConA促进小鼠T淋巴细胞的增殖。S1-AMP在一定浓度下均能协同有丝分裂原LPS促进小鼠B淋巴细胞的增殖。在相同浓度下,S1-AMP对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用强于AMP,说明硫酸基团的引入对白术多糖的体外脾淋巴细胞转化有增强作用,并且对白术多糖协同LPS促进小鼠B淋巴细胞的增殖有显著的促进作用。