大豆乳清中大豆异黄酮的提取纯化及其生物活性的研究

本试验以工业上生产大豆分离蛋白的废水——大豆乳清为原料，探索从其中回收大豆异黄酮的工艺，从而为大豆乳清的综合利用提供参考，同时也为大豆异黄酮的生产开辟新的途径。通过超滤、乙酸乙酯萃取、柱层析等提取纯化方法，制得了纯度为72.45％的大豆异黄酮产品，并对其抗氧化性和抗菌性进行了研究。 通过颜色反应、紫外光谱法和高效液相色谱法，对大豆乳清提取物进行了定性和定量研究。结果表明，大豆乳清中含有大豆异黄酮，其含量为7.12μg／mL，组成以genistin和daidzin为主，二者比例接近1:1，苷元型大豆异黄酮未检出。 大豆乳清在超滤之前，要进行除蛋白的预处理。本研究采用加金属盐和加热的方法沉淀大豆乳清蛋白，通过2因素3水平正交试验，确定较合适预处理条件为：把pH为4.5的原料乳清，按其中固形物含量加入5％的CaCl2，并在85℃下加热15min。在此条件下，蛋白质的清除率为49.8％，异黄酮的保留率为90.4％。通过单因素试验，确定了比较合适超滤条件：选择截留分子量为10000的聚醚砜膜，超滤压力选择34～51kPa，超滤温度选择30～40℃。在此条件下，蛋白质的截留率为83.9％，而大豆异黄酮的截留率为8.6％。 用柱层析法纯化大豆异黄酮时，通过单因素试验，确定了比较合适的吸附条件：选择D4006大孔树脂为吸附剂；在温度为25℃、流速为1mL／min、大豆异黄酮浓度为1mg／mL的条件下上柱吸附，进样量为2.67BV（柱体积）。先用蒸馏水在室温下洗涤，除去水溶性杂质；再用乙醇水溶液梯度洗脱，洗下大豆异黄酮。通过2因素3水平正交试验，确定了较合适的洗脱条件：洗脱温度选择75℃，洗脱流速选择1mL／min。 分别采用α-脱氧核糖氧化法和连苯三酚自氧化法，进行了大豆异黄酮清除羟自由基·OH和超氧自由基O2-·的抗氧化试验。结果表明，在适宜的浓度范围内，大豆异黄酮对羟自由基·OH和超氧自由基O2-·都有一定的清除能力，说明大豆异黄酮具有抗氧化性。通过滤纸片法进行了大豆异黄酮的抗菌试验。结果表明，大豆异黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和啤酒酵母都有一定的抗菌效果，其抗菌作用依赖于大豆异黄酮溶液的浓度，但对黑曲霉没有抗菌效果。