酶解乳清蛋白制备ACE抑制肽的研究

血管紧张素转换酶（Angiotensin-Ⅰ-converting enzyme,ACE）抑制剂具有降血压的作用,本文利用酶解法从乳清蛋白中制备ACE抑制肽。 改进并建立了可靠的ACE抑制率的体外检测方法,该方法具有良好的精确性和重现性,可以用于各种样品的ACE抑制率的检测。 以ACE抑制率为指标,从几种蛋白酶中筛选出碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳用酶。采用三因素二次正交旋转设计,以ACE抑制率和水解度为指标,对碱性蛋白酶水解乳清蛋白的条件进行了优化,得出碱性蛋白酶制备ACE抑制肽的最优条件为:水解温度50℃,底物浓度为5%,E:S为5.5%,通过单因素试验确定了最适水解时间为6h,在此条件下获得水解物的IC50值为0.97m/mL。同时发现水解度和ACE抑制率之间没有相关性。 利用6KDa超滤膜通过超滤对ACE抑制肽进行分离,确定了其工艺参数温度为20℃,压力为0.1MPa,在此条件下进行超滤,透过液和截留液的ACE抑制率分别提高了34%和19.58%,由此可见使用6KDa超滤膜可以有效的分离ACE抑制肽。 采用离子交换树脂对ACE抑制肽进行脱盐处理,以50r/min的流速过阳离子交换树脂柱,脱盐率达到80%,氮的回收率达到90%,而水解物的ACE抑制率几乎没有什么变化,说明酶解乳清蛋白制备ACE抑制肽时用阳离子交换树脂脱盐是可行的。 初步建立了生产ACE抑制肽的最佳工艺流程:乳清蛋白→水化→蛋白酶水解→水解液→离子交换树脂脱盐→冷冻干燥→产品,该工艺直接对水解物进行脱盐可以缩短生产ACE抑制肽的工艺步骤,减少蛋白质的损失,而且水解物的ACE抑制率也较高,符合工业化生产的要求。