补阳还五汤及黄芪红花“益气活血”功效物质基础的移行分析

中风是目前威胁中老年人健康且致残致死率高、并发症多的疾病之一,其中以缺血性中风最为常见。中医认为缺血性中风的病理机制为气虚血瘀。补阳还五汤出自清代名医王清任的《医林改错》,作为治疗缺血性中风的经典方剂,其主要功效为补气活血。目前研究发现补阳还五汤中起补气活血作用的主要药味是为黄芪和红花,其主要有效成分为黄芪甲苷和羟基红花黄色素A。为揭示补阳还五汤治疗缺血性中风的药效物质基础,本研究选取补阳还五汤配方颗粒为研究对象,运用体内药物分析方法,测定大鼠体内代谢前后补阳还五汤主要有效成分黄芪甲苷和羟基红花黄色素A的含量变化,为阐明补阳还五汤主要功效“益气活血”的物质基础提供参考依据。研究目的1建立方便可靠的黄芪甲苷和羟基红花黄色素A的含量测定方法,分别测定补阳还五汤配方颗粒及单味药在大鼠体内代谢后的主要有效成分的含量。2比较大鼠体内代谢前后有效成分黄芪甲苷和羟基红花黄色素A的含量变化,确定复方配伍对补阳还五汤药效的影响,以阐明补阳还五汤益气活血的药效物质基础。研究方法1、通过对色谱条件、样品制备及前处理方法的优化,以及方法学考察,建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法和高效液相色谱-紫外检测法,测定补阳还五汤配方颗粒、黄芪和红花药材中的黄芪甲苷、羟基红花黄色素A含量的方法,同时,验证本实验方法的可行性、精密度、准确性和重现性。2、将大鼠随机分为补阳还五汤配方颗粒组、黄芪组和红花组,分别根据换算得到的临床等效剂量灌胃给药,补阳还五汤配方颗粒溶液、黄芪水煎液和红花水煎液均为10ml/kg,连续给药8d后取含药血清和含药脑脊液样品进行含量测定;其中,灌胃3d后入代谢笼,分别收集尿液和粪便样品进行含量测定。比较大鼠体内代谢前后黄芪甲苷、羟基红花黄色素A浓度的变化,探讨补阳还五汤配方颗粒益气活血功效的物质基础与黄芪甲苷、羟基红花黄色素A含量变化的关系。研究结果1本实验建立的含量测定方法为高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定黄芪甲苷和高效液相色谱-紫外检测法测定羟基红花黄色素a的含量,该方法简便易操作、快捷且成本小。2经体内代谢后含药脑脊液、含药尿液及含药粪便中有效成分黄芪甲苷和羟基红花黄色素a的含量较低,其中单味药组均高于复方组。3检测结果发现,经体内代谢后补阳还五汤配方颗粒组含药血清中有效成分黄芪甲苷的含量远高于黄芪组;同时发现补阳还五汤配方颗粒组含药血清中有效成分黄芪甲苷的含量为原配方颗粒中的10%,黄芪组含药血清中有效成分黄芪甲苷的含量为原药材水煎液中的4%,因此经体内代谢后补阳还五汤配方颗粒有效成分黄芪甲苷的含量下降幅度远低于黄芪单味药。4检测结果发现,经体内代谢后补阳还五汤配方颗粒组含药血清中有效成分羟基红花黄色素a的含量远高于红花组;同时发现补阳还五汤配方颗粒组含药血清中有效成分羟基红花黄色素a的含量为原配方颗粒中的1.2%,而红花组含药血清中有效成分羟基红花黄色素a的含量为原药材水煎液中的0.6%,因此经体内代谢后补阳还五汤配方颗粒有效成分羟基红花黄色素a含量变化下降幅度远低于红花单味药。研究结论1、本研究建立的高效液相色谱-蒸发光散射检测法和高效液相色谱-紫外检测法,测定补阳还五汤配方颗粒中的黄芪甲苷、羟基红花黄色素a,以及黄芪和红花中的黄芪甲苷、羟基红花黄色素a的含量,该测定方法线性关系、回收率、精密度和稳定性良好,表明该方法操作简便、灵敏度高且杂质干扰小。2、对含药脑脊液含量检测可推断复方配伍可以降低有效成分黄芪甲苷、羟基红花黄色素a脑中的浓度,防止短期内过多的有效成分对急性脑卒中损害,同时起到了该方“祛瘀而不伤正”原理。对含药尿液及含药粪便含量检测发现复方组有效成分黄芪甲苷、羟基红花黄色素a的浓度低于单味药组,说明复方配伍能够降低有效成分的代谢,对维持功效有促进作用。3、补阳还五汤复方颗粒组体内代谢后有效成分黄芪甲苷和羟基红花黄色素a的浓度高于单味药材组,而且下降幅度较低,说明复方配伍能够对方中有效成分的含量维持起到一定的作用,使得复方的疗效远高于单味药材的作用,说明了方剂中“整体取性”的基础。而单味药黄芪和红花中经体内代谢后有效成分浓度低,下降幅度明显,也表明复方配伍对黄芪的补气功效和红花的活血化瘀功效起到促进和维持功效的作用。4、通过研究我们推测补阳还五汤复方配伍对代谢前后主要有效成分黄芪甲苷和羟基红花黄色素A的含量调控可提升或维持单味药材黄芪、红花主要有效成分在体液中的浓度,对复方配伍的增效作用有积极作用,对该方配伍的合理性、益气活血的功效物质基础提供实验依据。