大豆异黄酮苷元—金属络合物的合成、表征及其抗衰老药理活性的研究

大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次级代谢产物。由于是从植物中提取,与雌激素有相似结构,因此大豆异黄酮又被称为植物雌激素。大豆异黄酮的母核是3-苯并吡喃酮结构,7-位羟基上的氧原子是大豆异黄酮抗氧化的主要原因。因此,本文进行大豆异黄酮苷元和金属的络合反应及其抗衰老活性研究,以筛选具有强抗衰老活性的药物。本文的主要实验方法内容如下:一、实验以大豆胚芽为原料从中提取大豆异黄酮,通过设置乙醇浓度、提取温度、提取时间、料液比和提取次数五个因素的单因素实验、L9(34)正交试验来确定大豆异黄酮的最佳提取工艺为:温度80℃,固液比l:10,乙醇浓度80%,提取时间1.5h,连续提取2次。此时,大豆异黄酮的提取率达到最大,为88.35%。二、粗提物经过酸水解得到大豆异黄酮苷元,条件是:25%盐酸,水解温度90℃,水解时间4h。用蒸馏水除去水溶性蛋白和糖类等,乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂来纯化大豆异黄酮苷元。利用制备液相从大豆异黄酮中分离出大豆苷元和染料木素单体。制备得到的单体样品分别用紫外光谱、红外光谱和高效液相色谱手段表征,证明得到的样品分别是纯度为98.07%的大豆苷元和纯度为98.87%的染料木素。三、染料木素分别和铁、锌、铜三种金属通过络合反应得到相应的金属配合物,并对合成的配合物分别通过紫外光谱、红外光谱、元素分析、金属含量测定和热分析进行表征。结果表明,染料木素金属配合物的分子式分别为:Zn(C15H9O5)2·2H2O、Fe(C15H9O5)2·2H2O和Cu(C15H9O5)2·2H2O。四、体外抗氧化活性是首先研究了大豆苷元和染料木素对DPPH自由基的清除作用,结果显示,染料木素对DPPH自由基的清除作用大于大豆苷元DPPH自由基的清除作用。其次,染料木素及其金属络合物对DPPH自由基的清除率均是随着浓度的增大而增大。体内抗氧化活性则采用小鼠连续皮下注射D-半乳糖40天后制得亚急性衰老模型,灌胃染料木素及其配合物3周。高剂量(100mg/kg)和低剂量(50mg/kg)的染料木素及其配合物均能使衰老小鼠体内血清、脑和肝组织的GSH-Px活力、SOD活力及T-AOC含量显著升高,MDA含量也明显降低。因此,可推出染料木素及其络合物具有抗氧化的能力,且络合物的抗氧化能力强于染料木素。动物实验结果表明,血清中,三种配合物的抗氧化活性强弱顺序为:铜配合物>铁配合物>锌配合物。肝组织中,铁配合物>铜配合物>锌配合物。脑组织中,铁配合物和锌配合物几乎等效,铜配合物相对较差。由此结果说明,金属配合物有一定的组织选择性,而染料木素的金属配合物则可以作为一类良好的抗衰老候选药物。