蝗虫黄酮的提取分离和生物活性研究

本文采用比色法测定了不同品种不同产地蝗虫体内黄酮类化合物的含量，并采用正交试验优化出蝗虫黄酮提取的工艺条件。针对蝗虫黄酮提取物，采用比色法研究其体外抗氧化能力；利用高脂饲料诱导小鼠高脂血症模型，研究其降血脂作用；利用老少龄小鼠对照试验研究了其体内抗氧化作用；通过运动小鼠负重游泳实验，研究了其抗疲劳作用。结果表明： 1．采用正交试验优化常规提取蝗虫总黄酮的最佳工艺条件为：以脱脂蝗虫干粉为材料，90％的乙醇为溶剂，1:30（w／v）的料液比，65℃下提取2小时。在常规提取基础上酶法辅助提取的最佳工艺条件是：利用用量为底物1％的复合酶，在pH=5.0，温度为45℃的条件下酶解1.0h，然后应用常规方法进行提取。 2．不同品种不同产地的蝗虫体内黄酮类化合物的含量具有较大的差异，其中总黄酮含量最高的是陕西长安中华稻蝗，高达22.61 mg/g，陕西长安短星翅蝗体内总黄酮含量最低，为3.79 mg/g；同一品种不同产地的蝗虫体内总黄酮的含量也有差异，如内蒙黄胫小车蝗的含量为17.68 mg/g，而陕西长安黄胫小车蝗则为6.00mg/g。 3．中华稻蝗总黄酮酶法辅助提取液的浓缩浸膏依次用氯仿、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取分离，然后对得率最多的乙酸乙酯萃取部分进行了多次柱色谱分离，并通过薄层色谱及颜色反应进行鉴定，证明得到了3个黄酮类组分。 4．中华稻蝗各黄酮类组分均有较好的总抗氧化能力和较好的还原能力。除正丁醇萃取物的总抗氧化能力在20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL浓度范围内小于BHT的总抗氧化能力外，其余几种黄酮类组分均大于BHT的总抗氧化能力，其中水相残留物的抗氧化能力高达（223.73±2.86）U／mL。在30μg/mL、60μg/mL、90μg/mL、120μg/mL浓度范围内，还原能力从大到小的顺序是：水相残留物、酶法粗提物、正丁醇萃取物、BHT、乙酸乙酯萃取物。 中华稻蝗各黄酮类组分在各个自由基体系中均有较好的清除自由基的能力，且清除率和浓度成正比例关系；在3种萃取物中，水相残留物在各自由基体系中的清除能力均大于BHT，清除羟基自由基的IC50为25.16±0.64μg/mL、清除超氧阴离子自由基的IC50为35.06±0.86μg/mL、DPPH为19.86±1.24μg/mL、脂质过氧化为43.75±0.94μg/mL；其他两种萃取物在不同体系中的清除率与BHT大小关系不确定。 5．中华稻蝗黄酮提取物能显著降低高脂血症小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量，显著提高了高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量，有降血脂作用。中华稻蝗黄酮提取物还能显著降低动脉粥样硬化指数（AI），有预防动脉粥样硬化的作用。 6．中华稻蝗黄酮提取物三个剂量组均能极显著降低老龄小鼠血清和组织脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量，高剂量组显著提高血清和组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）的活性，中高剂量组均能极显著增强血清和组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果说明中华稻蝗黄酮提取物具有抗氧化性。 7．中华稻蝗黄酮提取物能明显延长小鼠负重游泳时间，增加肝糖元的储备量、提高血清乳酸脱氢酶（LDH）的活力，降低运动后血清尿素氮（BUN）含量的增加，说明中华稻蝗黄酮提取物在增加机体对运动负荷的适应能力、抵抗疲劳产生和加速疲劳消除方面具有明显的作用。