高产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件

研究青霉菌Penicillium Q5和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长,酶浓度,酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Q5,培养液中加入浓度0.5%甘氨酸和含量10%的蔗糖处理后,在质量浓度均为10 mg/mL的溶菌酶和蜗牛酶(1︰1)酶解作用下,35℃处理3 h,原生质体生成量达到最大值,为7.35×106cfu/mL;亲本菌株K3,用4 U/mL的青霉素处理,在1 mg/mL的溶菌酶作用下,35℃处理1 h,原生质体形成率与再生率的乘积达到最大值,此时K3原生质体量为1.46×107cfu/mL。青霉菌在65℃热灭活的时间为1 h,紫外灭活时间为3 min;枯草芽孢杆菌在65℃热灭活的时间是2.5 h,紫外灭活时间为5 min。这为后续原生质体融合选育具有抗逆性的高产纤维素酶菌株打下基础。