鸭肝乳酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

新鲜鸭肝经匀浆、磷酸盐缓冲液抽提,乙醇和硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的乳酸脱氢酶。该酶经纯化后酶比活力达到668.82 U/mg,酶活回收率为25.79%,纯化倍数为185.78。该酶的全分子质量约为170.93 k D,亚基分子质量为44.72 k D;最适反应温度为45℃,最适pH值为7.4,在25～45℃及p H 5～10的范围内稳定性较好;在45℃、pH 7.4条件下,测得该酶对底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotid,NADH)的Km值为3.407μmol/L,对丙酮酸钠的Km值为8.431μmol/L;草酸、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、Cu2+、Ag+对该酶的抑制作用最强,Co2+、K+对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用,而高浓度时具有抑制酶活性的作用。