羊脾脏多肽的酶法制备及体外抗氧化机理的研究

本研究以羊脾脏蛋白为原料，用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶双酶水解，选择最佳水解条件。结果表明：温度60℃C，pH7.0，加酶量5.0％，时间5.5h为最佳水解条件，水解率达60.59％，二苯代苦味酰基自由基（DPPH）值即抗氧化活性中等偏上。用Scphadex G—25分离水解混合物，分别收集得到四个峰，其产物编号为F1、F2、F3、F4，并进行DPPH测试以确定其抗氧化活性，测得F3抗氧化能力较强。对F3进行Tricine—SDS—PAGE电泳分析，测定其分子量。 通过对F3进行非脂质体系和脂质体系体外抗氧化活性的测试表明：在几种不同的自由基产生体系中：F3能显著抑制·OH的生成，随浓度的增大，F3清除DPPH能力增强；并且抗氧化能力随浓度的增加而增强；F3对O2?没有明显的清除作用。采用DPPH法对复合抗氧化剂的活性进行评价：柠檬酸+脾肽的清除能力比单独的脾肽和单独的柠檬酸效果都显著（P＜0.01），但抗坏血酸与脾肽的复合抗氧化效果不显著。在卵磷脂制备的脂质体模拟细胞膜上的抗氧化体系和猪油体系中，F3均表现出一定的抗氧化活性，并随添加浓度的增加，其抗氧化活性不断增强。