笃斯越橘花色素的分离鉴定及栽培种花色素的定量分析

越橘果是杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium. spp)植物越橘的成熟的果实。我国有着丰富的越橘资源，分布于全国各地，主产于西南、华南和东北。大小兴安岭产量可占全国的90％，丰年产量数十万吨至百万吨。越橘果中含有丰富的活性成分，不少品种已经被欧美开发成重要的水果和药物。对越橘果进行深入研究，明确其生物组成、活性物质及其作用机制，有利于开发和利用越橘资源。 现代研究表明：越橘果中含有丰富的黄酮和花色素类物质，他们有很强的抗氧化活性，可以对抗自由基，延缓衰老，防止细胞蜕变，花色素苷可以抑制血小板聚集，能有效预防大脑病变、动脉硬化和肿瘤，有抑菌、杀菌、抗肿瘤、抗辐射等功能，而且花色素类物质被国外的临床和科学实验证明还有治疗和预防各类眼科疾病的功效，在法国花色素苷含量＞25％的提取物已经被收入药典。意大利、法国、西班牙、韩国、美国和新西兰已作为医药品用于夜盲症、毛细血管硬化、脑血管障碍、胃溃疡的治疗。对越橘果活性成分进行研究具有一定的理论基础和现实意义。 实验采用溶剂萃取法和经典柱层析手段，对笃斯越橘(Vaccinium uliginosum L．)果所含花色素进行分离，利用高效液相色谱法(HPLC)测定了越橘果中花色素苷含量，并对越橘果中总花色素提取物进行了抗氧化活性的初步实验。 越橘果中花色素(苷)及黄酮类物质的提取采用0.1％HCl-MeOH溶液常温浸提，浓缩后通过Amberlite XAD-7树脂柱富集，水洗去除杂质后用甲醇洗脱，对得到的花色素总提取物使用乙酸乙酯萃取，分成两相后，使用Sephadex LH-20凝胶对两相分别进行柱层析，用甲醇洗脱，在水相分离出花色素苷两种、在有机相中分离到一种黄酮。经过理化性质分析、TLC、HPLC分析和波谱分析确定结构，分别鉴定为矢车菊-3-O-半乳糖苷(cyanidine-3-O-galactoside)、二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷(malvinin-3-O-glucoside)及黄酮类物质杨梅素(myricaceae)，以上物质均为首次从笃斯越橘果中获得。 使用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，对从欧洲引进的越橘的十六个栽培品种的果实进行了花色素(苷)含量的测定，测定条件为：分析柱Zorbax SB C18(150 mm×4.6mm 5μm)，流动相为A：10％甲酸溶液B：甲醇。梯度洗脱条件：0～20 min 10％～60％B；20～25 min 60％～100％B；25～30 min 100％B；流速：0-5 ml/min；检测波长λ=525 nm；柱温：25℃；灵敏度为0.02AUFS。 测试结果显示越橘果中总花色素含量普遍较高，平均达到300 mg/100 g鲜果，但是不同品种间有很大的差别，在Chignecto(芝妮)中总花色素达到454 mg/100 g鲜果， 吉林农业大学硕士学位论文 笃斯越橘花色素的分离鉴定及栽培种花色素的定量分析 而在Bluejay中只有1 91 .02m岁1009鲜果，使用四种对照品测定获得结果不同，矢车菊 一3一O一半乳糖等(cyanidine一3一O一galactoside)为对照测定结果偏高。同时在测定中还发现 不同的品种中不同花色素(普)含量的差别，本论文选用了四种花色素苍标准品，其中 矢车菊一3一o一半乳糖普(eyanidine一3一O一galactoside)在CA一206中是47.71 mglloog鲜果， 而在B10而don中只有6.61m岁1009鲜果，显示了品种的差异，定量结果为有目的的利用 越橘提供了数据参考， 论文对笃斯越橘果的甲醇提取物还进行了一系列的抗氧化性实验，花色素普对脂质 过氧化、DppH产生的自由基以及黄喋咖黄漂吟酶诱导产生的超氧阴离子都有很强的抑 制作用，结果显示提取物有较强的杭氧化活性，既可以对抗并清除自由基，又可以清除 体内多余的超氧阴离子，而且在一定范围内，杭氧化能力与浓度有依赖关系。说明越橘 花色素是一类活性较强的物质，既可以用作保健食品的添加剂，又可以进一步分离，深 入研究，获得具有杭氧化作用药物的先导物质。 综上，本论文对越橘果中的花色素进行了初步的分离鉴定，获得两个花色素的单体 和一个黄酮单体，为其进一步的分离摸索了条件。花色素含量的分析和杭氧化活性的实 验初步为越橘的选择性开发和深入的研究提供了有效的参考。