黑米是优异的稻种资源,富含天然花色苷类化合物。花色苷是一类天然色素,属于黄酮类物质,具有抗氧化、无毒、无突变等特点。酒精滥用是全球范围内重要公共卫生问题,过量饮酒会在机体代谢过程中产大量的自由基与活性氧,导致肝脏及多器官损伤。本文研究了黑米中花色苷主要成分的提取工艺及对酒精性肝损伤的影响。
1.鉴定黑米花色苷的主要成分及确定其检测方法。以矢车菊素-3-葡萄糖苷为标准品,建立了黑米花色苷的高效液相色谱(HPLC-DAD)法。通过液质联用(HPLC-ESI-MS)鉴定出四种花色苷,分别为矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside, 91.0%),矢车菊素-3,5-葡萄糖苷(cyanidin-3, 5-diglucoside, 0.92%),矢车菊素-3-芸香糖苷(cyanidin-3-rutinoside, 0.94%)和芍药素-3-葡萄糖苷(peonidin-3-glucoside, 7.13%)。
2.确定黑米花色苷最佳提取工艺,建立大孔吸附树脂纯化花色苷的方法。以矢车菊素-3-葡萄糖苷为跟踪指标,通过单因素和正交试验,对各因素进行研究,比较9种大孔吸附树脂对花色苷的静态吸附和解吸性能。黑米花色苷最佳提取条件,提取液乙醇/水/盐酸体积比为50/50/0.5,温度50℃,固液比为1:10 (g/mL),提取时间为1小时,提取次数为3次。确定了AB-8为最佳吸附树脂,最佳条件为:洗脱剂为80%乙醇,上样流速为1.0BV/h,解吸流速为2.0BV/h。结论:测定经树脂纯化后提取物中花色苷的含量达到22.5 %(粗提物含量为3.74%),树脂富集倍数为6.02。
3.研究了黑米四种花色苷在温度(80°C, 90°C和100°C;4°C, 20°C和37°C),pH1.0-6.0下的稳定性。结果表明四种花色苷降解遵循一级反应方程,随温度降解符合Arrhenius方程。四种花色苷的活化能(Ea),半衰期(t1/2 )和反应数率常数(k)不同且差异显著。花色苷的降解率均随温度和pH值得上升而增加,尤其是当温度达到100°C,pH值达到5.0时。贮藏温度和pH值对花色苷稳定性及色差有很大影响,花色苷溶液色差利用CIE L*a*b*参数对其进行评价。随温度增加在pH3.0时,L*, a*, b*值明显降低。
4.探讨了黑米花色苷提取物(AEBR)对大鼠慢性酒精肝损伤的影响。结果表明:雄性Wistar大鼠摄入酒精后,血清中谷草酰胺转氨酶(AST),丙氨酸转氨酶(ALT)和γ-谷氨酸转氨酶(GGT)以及肝组织中丙二醛(MDA)显著增加(P<0.05)。AEBR干预可显著缓解酒精伤害,尤其高剂量组(500mg/kg),AEBR(500mg/kg)处理可显著降低血清中酶(AST, ALT和GGT)活性(P<0.01),肝脏中MDA水平及甘油三酯(TG),总胆固醇的浓度(TCH)。花色苷干预组表现出正常的抗氧化体系,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-s-转移酶(GST)均在正常范围。以上结果均与组织学观察相一致。这表明AEBR能缓解酒精伤害,可明显减轻酒精对机体脂质代谢和抗氧化系统的不利影响。
