高产多糖大球盖菇菌株原生质体诱变选育及其抗氧化能力研究

大球盖菇(Stropharia rugoso-annulata),属担子菌门(Basidiomycota),层菌纲(Hymenomycetes),伞菌目(Agaricales),球盖菇科(Strophariaceae),球盖菇属(Stropharia)。富含蛋白质、多糖、矿质元素、维生素等营养物质,其多糖具有预防冠心病、助消化、缓解精神疲劳等功效,对小白鼠S-180肿瘤及艾氏腹水癌抑制率达70 %。 紫外线原生质体诱变技术是一种行之有效的育种方法,至今仍广泛应用。真菌多糖在国际上被称为“生物反应调节物”,由于其独特的生理活性,目前正成为国内外众多学科领域研究的热点之一。 本课题研究了大球盖菇菌丝体原生质体的制备和再生条件,通过紫外线诱变原生质体技术选育出高产多糖的大球盖菇菌株,并初步研究了诱变菌株和出发菌株的抗氧化能力,得到以下结论: 大球盖菇菌丝体原生质体制备的适宜条件为:在30℃、pH 5.5、1.5 %溶壁酶条件下,以0.6 mol/L甘露醇作稳渗剂,酶解培养3 d的菌丝体2.5 h,原生质体产量达到1.36×107个/mL。适宜再生培养基组成为:马铃薯200 g,蔗糖20 g,蛋白胨2 g,酵母粉2 g, KH2PO4 1.5 g,K2HPO4 1.5 g ,MgSO4?7H2O 1.5 g,维生素B1 0.1 g,维生素B6 0.1 g,蒸馏水1 000 mL,琼脂20 g。适宜再生的稳渗剂为0.6 mol/L甘露醇。上述条件下,双层平板法进行再生试验,再生率达0.96 %。 在15 W紫外灯、照射距离为30 cm条件下,确定了大球盖菇原生质体紫外线辐射至半致死率的照射时间为20 s。以出发菌株为对照,根据拮抗反应和生长状况筛选出100株大球盖菇原生质体紫外线诱变菌株。以原始出发菌株为对照,从中筛选出10株大球盖菇多糖含量高于原始出发菌株的诱变菌株,将10株诱变菌株及原始出发菌株分别连续传代8次,从中筛选出1株多糖含量高且稳定性好的诱变菌株,编号为093,其多糖含量比出发菌株提高了25.3 %。 以灌胃蒸馏水为对照,初步研究了大球盖菇诱变菌株和出发菌株对小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidsade,GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶( Superoxide dismutase , SOD )活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量的影响。结果表明,小鼠全血GSH-Px活性和SOD活性有所增加,分别在第15 d和第9 d达最高,诱变菌株菌粉制备液组小鼠全血GSH-Px活性和SOD活性分别是对照组的1.055倍和1.284倍,出发菌株菌粉制备液组的1.008倍和1.099倍。小鼠全血MDA含量明显降低,第18 d时达最低,诱变菌株菌粉制备液组小鼠全血MDA含量比对照组降低了0.465倍,比出发菌株菌粉制备液组降低了0.136倍。GSH-Px、SOD、MDA实验表明,大球盖菇诱变菌株比出发菌株的抗氧化能力更强。