应用SYBR GreenⅠ溶解曲线检测食源性单增李斯特菌

基于单增李斯特菌hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因分别合成两对引物,确立SYBR GreenⅠ荧光PCR检测单增李斯特菌两个特异性基因的最佳反应体系及条件,反应液经凝胶电泳验证,验证结果显示,扩增出的两条不同大小、不同Tm值的目的核酸片段,分别对应两条荧光PCR溶解曲线上的两个独立波峰。基于单增李斯特菌hlyA基因建立标准曲线,相关系数为0.996,最低检出限约为89CFU/mL。为检验方法的可行性,对鲜活白蚬子样品中分离出的疑似菌株进行实际检测,所得阳性结果经国家标准方法（GB4789.30-2010）验证,验证结果表明,SYBR GreenⅠ荧光PCR实际检测阳性结果与GB4789.30-2010检测结果一致。