苦荞麸皮中黄酮类化合物的提取、分离及其抗氧化活性的研究

本文以苦荞麸皮粉为原料,主要研究了黄酮类化合物溶剂提取、微波提取、超声波提取三种提取方法,通过单因素试验和响应面试验确定了三种提取方法的最佳工艺参数,并对三种提取方法进行了比较;利用大孔吸附树脂对苦荞麸皮黄酮类化合物的粗提液进行了纯化,通过试验确定了AB-8型大孔吸附树脂及其纯化的最佳工艺参数,并通过七种不同的体系研究了苦荞黄酮类化合物的抗氧化性能。 主要试验结果如下: 1.AlCl3法测定总黄酮结果稳定,以芦丁为标准品时,在0-0.2mg/mL浓度范围内线性较好,标准曲线方程为Y=0.2936X+0.0025,其R2值为0.9994;AlCl3法精密度高、重现性好,5次重复测定的RSD值仅为1.222%;回收率较高,在5次加样回收率试验中,其平均加样回收率达到102.83%,RSD值为2.57%。 2.有机溶剂直接浸提黄酮类化合物的最佳工艺参数为:提取4.8h、液固比50∶1、提取2次、溶剂pH值10、提取温度67.2℃、乙醇浓度60.1%,黄酮提取率为5.48%。 3.微波辅助提取黄酮类化合物的最佳工艺参数为:预浸19.9min、微波功率600W、微波处理20min、乙醇浓度54.1%、液固比34.7∶1、提取1次、硼砂加入量0.002g,黄酮提取率为9.23%。 4.超声波辅助提取黄酮类化合物的最佳工艺参数为:超声波功率750W、超声波处理25.3min、乙醇浓度48.8%、液固比24∶1、提取3次、乙醇溶液pH值11,黄酮提取率为7.56%。 5.AB-8型大孔吸附树脂对黄酮类化合物具有较好的吸附和解吸能力。其纯化黄酮类化合物的最佳工艺参数为:吸附条件为上柱速率1.0mL/min,吸附料液浓度1.202mg/mL,pH值6.5;解吸条件为解吸溶剂70%乙醇溶液,洗脱流速0.5mL/min。 6.通过黄酮类化合物与特定试剂颜色反应试验和黄酮类化合物UV光谱特征图检验试验,初步鉴定出分离纯化所得苦荞麸皮天然黄酮类化合物产品为黄酮醇黄酮。 7.七种不同体系的体外抗氧化实验表明,试样A（苦荞麸皮黄酮粗提物）,试样B（苦荞麸皮黄酮纯化物）,在七种体系中都具有一定的抗氧化性能,而且随着浓度的增加而增强。 在H2O2体系中,试样B与Vc的清除能力相当,试样A弱于试样B和Vc,强于BHT。 在羟基自由基（OH）体系中,在相同浓度下,试样A,B清除OH的作用都弱于Vc。 在超氧阴离子O2体系中,Vc清除超氧阴离子自由基的能力最强,在低浓度时,就有较强的清除超氧阴离子自由基的能力。试样A,B和BHT的在试验浓度范围内对超氧阴离子自由基清除效果一般,最高清除率分别只有51.46%,59.61%和49.93%。 在还原能力体系中,试样A的还原能力与BHT的相差不大,试样B的还原能力明显强于试样A、Vc及BHT。 在亚硝酸盐体系中,Vc对亚硝酸盐的清除作用较试样A,B及BHT要强。 在烷基R·体系中,试样A、B和Vc、BHT对烷基自由基都具有一定的清除能力,但不明显。 在DPPH·体系中,Vc对DPPH·自由基的清除率达到85.31%,样品A、B的清除率也分别达到57.22%和50.43%,是BHT的2.5倍和2.2倍。